ClearLLab 10C - RO - Versiunea română

COMBINA Ț II DE ANTICORPI CE PENTRU ANALIZA LEUCEMIEI/LIMFOMULUI* PROFILURI C LEAR LL AB 10C

REGISTRU DE CAZURI

Fiecare eveniment contează * Numai limfom non-Hodgkin

1

Beckman Coulter • Profiluri ClearLLab 10C • C33368 AB

CUPRINS

INTRODUCERE...........................................................................3 INFORMA Ț II GENERALE...........................................................3 RECOMANDĂRI CONSENSUALE PRIVIND IMUNOFENOTIPAREA...............................................................4 DOMENIUL DE UTILIZARE A PROFILURILOR CLEARLLAB 10C.........................................................................4 PROFILURI CLEARLLAB 10C...................................................4 SET DE COMPENSARE CLEARLLAB.....................................5 SELECTAREA ȘI INTERPRETAREA CAZURILOR................5 DOCUMENTE CONEXE.............................................................6 REFERIN Ț E...................................................................................6 CAZURI.........................................................................................7 NICIO ANOMALIE LA IMUNOFENOTIPARE.........................7 SÂNGE INTEGRAL PERIFERIC............................................ 7 Cazul 1: Sânge integral normal........................................7 MĂDUVĂ OSOASĂ.................................................................32 Cazul 2: Măduvă osoasă normală...............................32 GANGLION LIMFATIC........................................................... 56 Cazul 3: Ganglion limfatic normal..............................56 PROCES NEOPLAZIC DE ORIGINE CELULARĂ B........... 80 LEUCEMIE LIMFOBLASTICĂ/ LIMFOM LIMFOBLASTIC CU CELULE B........................ 80 Cazul 4: Leucemie limfoblastică acută/ Limfom limfoblastic cu celule B................................. 80 LEUCEMIE LIMFOBLASTICĂ/ LIMFOM LIMFOBLASTIC CU CELULE B.......................105 Cazul 5: Leucemie limfoblastică acută/ Limfom limfoblastic cu celule B................................105 LEUCEMIE LIMFOCITARĂ CRONICĂ/ LIMFOM LIMFOCITAR MIC................................................130 Cazul 6: Leucemie limfocitară cronică/ Limfom limfocitar mic....................................................130 LEUCEMIE LIMFOCITARĂ CRONICĂ/ LIMFOM LIMFOCITAR MIC................................................154 Cazul 7: Leucemie limfocitară cronică/ Limfom limfocitar mic.................................................... 154 LIMFOM CU CELULE ÎN MANTA..................................... 178 Cazul 8: Limfom cu celule în manta.........................178 MIELOMUL CELULELOR PLASMATICE.......................202 Cazul 9: Mielomul celulelor plasmatice.................202 LIMFOM FOLICULAR.......................................................... 226 Cazul 10: Limfom folicular........................................... 226

LIMFOM CU CELULE B PROVENIT DIN CENTRUL GERMINAL........................................................250 Cazul 11: Limfom cu celule B provenit din centrul germinal...............................................................250 LIMFOM CU CELULE B MATURE................................... 274 Cazul 12: Limfom cu celule B mature......................274 LIMFOM CU CELULE B MATURE...................................298 Cazul 13: Limfom cu celule B mature..................... 298 PROCESUL NEOPLASTIC DE ORIGINE CELULARĂ T.......................................................................... 322 LEUCEMIE LIMFOBLASTICĂ/ LIMFOM LIMFOBLASTIC CU CELULE T...................... 322 Cazul 14: Leucemie limfoblastică cu celule T/ Limfom limfoblastic cu celule T............................... 322 LEUCEMIE LIMFOBLASTICĂ/ LIMFOM LIMFOBLASTIC CU CELULE T......................346 Cazul 15: Leucemie limfoblastică cu celule T/ Limfom limfoblastic cu celule T...............................346 LIMFOM CU CELULE T MARI GRANULARE..............370 Cazul 16: Tulburare limfoproliferativă cu celule T........................................................................... 370 LIMFOM CU CELULE T MARI GRANULARE..............394 Cazul 17: Tulburare limfoproliferativă cu celule T...........................................................................394 PROCES NEOPLASTIC DE ORIGINE MIELOIDĂ..............418 LEUCEMIE MIELOIDĂ ACUTĂ..........................................418 Cazul 18: Leucemie mieloidă acută.......................... 418 LEUCEMIE MIELOIDĂ ACUTĂ.........................................442 Cazul 19: Leucemie monocitară acută..................442 LEUCEMIE MIELOIDĂ ACUTĂ.........................................466 Cazul 20: Leucemie mieloidă acută-NOS............466 LEUCEMIE MIELOIDĂ ACUTĂ........................................ 490 Cazul 21: Leucemie acută promielocitară........... 490 LEUCEMIE MIELOIDĂ ACUTĂ..........................................514 Cazul 22: Leucemie monocitară acută................... 514 SINDROM MIELODISPLAZIC........................................... 538 Cazul 23: Sindrom mielodisplazic........................... 538 SINDROM MIELODISPLAZIC...........................................562 Cazul 24: Sindrom mielodisplazic........................... 562

Fiecare eveniment contează

2

Beckman Coulter • Profiluri ClearLLab 10C • C33368 AB

INTRODUCERE Acest registru de cazuri a fost creat pentru a facilita analiza datelor de imunofenotipare în flux citometric generate folosindu-se profiluri ClearLLab 10C cu reactiv marcat CE-IVD de la Beckman Coulter pentru analiza leucemiei și limfomului pe citometrele în flux Beckman Coulter Navios și Navios EX. Cazurile exemplificative cu constatări caracteristice tipice diferitelor neoplasme limfoide și mieloide sunt incluse, la fel ca și cazurile pacien ț ilor cu constatări clinice și/sau de laborator care sugerează un proces neoplazic latent, însă în cazul cărora nu se identifică nicio anomalie la imunofenotipare. Tipurile de eșantioane includ sânge integral periferic, măduvă osoasă și ganglioni limfatici. Fiecare caz include o etichetă clinică în care sunt descrise popula ț ia de pacien ț i, antecedentele clinice ale acestora, fișierele cu date în mod listă specifice cazului pentru a permite reanalizarea lor de către utilizatorul acestui registru, protocoalele de analiză specifice ClearLLab 10C care trebuie utilizate cu datele în mod listă și un raport care prezintă analiza cu protocoalele furnizate. Fiecare raport include note de analiză care subliniază concluziile de imunofenotipare, precum și posibilele obstacole. NOTĂ: Exemplele de registru de cazuri sunt furnizate exclusiv în scop ilustrativ și nu pot fi reprezenta toate categoriile de neoplasme hematolimfoide. De asemenea, nu toate variantele de imunofenotipare descrise sau demonstrate sunt posibile. INFORMAȚII GENERALE Imunofenotiparea citometrică în flux evaluează prezen ț a și absen ț a antigenilor specifici pentru fiecare celulă individuală prezentă în eșantion. Atunci când sunt luate împreună, aceste rezultate generează un profil imunofenotipic pentru fiecare celulă, fie în concordan ț ă cu o popula ț ie așteptată (adică normală), fie incompatibilă cu o popula ț ie așteptată (adică aberantă) în respectivul tip de probă. La evaluarea probelor de la pacien ț i cu malignită ț i hematolimfoide suspectate, sunt implica ț i mai mul ț i pași 1 : • Evaluarea tuturor popula ț iilor de celule din probă. • Clasificarea fiecărei popula ț ii celulare ca fiind fie „normală”, fie „aberantă”. • Caracterizarea detaliată a popula ț iei aberante în func ț ie de prezen ț a sau absen ț a antigenilor, precum și de creșterea sau scăderea intensită ț ii colorării cu anticorpi eticheta ț i cu fluorocrom. • Interpretarea imunofenotipului aberant, care include informa ț ii suplimentare, cum ar fi istoricul clinic, histologia, citologia, imunohistochimia și studiile de genotipare, cum ar fi hibridizarea in situ, cariotiparea și diagnosticul molecular.

Fiecare eveniment contează

3

Beckman Coulter • Profiluri ClearLLab 10C • C33368 AB

RECOMANDĂRI CONSENSUALE PRIVIND IMUNOFENOTIPAREA În ultimele două decenii au apărut recomandări consensuale pentru imunofenotiparea citometrică în flux a probelor de la pacien ț i cu malignită ț i hematolimfoide cunoscute sau suspectate și acestea au fost publicate în literatura știin ț ifică sub forma unor orientări. Imunofenotiparea citometrică în flux a fost inclusă în clasificarea OMS a tumorilor hematopoietice și ț esuturilor limfoide din 2008 2 . Indica ț iile medicale și validarea testelor de citometrie de flux, inclusiv detaliile preanalitice, analitice și postanalitice ale testărilor, sunt abordate în recomandările Conferin ț ei interna ț ionale de consens Bethesda din 2006 3,4,5 și instruc ț iunile de practică ICSH/ICCS pentru testele de fluorescen ț ă bazate pe celule 6,7,8 . DOMENIUL DE UTILIZARE A PROFILURILOR ClearLLab 10C Panelurile ClearLLab 10C sunt destinate utilizării pentru diagnosticele in vitro, în scopul identificării calitative a popula ț iilor celulare prin imunofenotiparea cu parametri multipli pe citometrele în flux Navios și Navios EX. Acești reactivi sunt utiliza ț i pentru a facilita ob ț inerea diagnosticului diferen ț ial în cazul pacien ț ilor cu anomalii hematologice care prezintă sau sunt suspecta ț i de următoarele neoplasme hematopoietice: leucemie cronică, leucemie acută, limfom non‑Hodgkin, mielom, sindrom mielodisplazic (MDS) și/sau neoplasme mieloproliferative (MPN). Reactivii pot fi utiliza ț i cu eșantioane de sânge integral periferic (recoltat în K2EDTA, acid citrat dextroză (ACD) sau heparină), măduvă osoasă (recoltată în K2EDTA, ACD sau heparină) și ganglioni limfatici. Interpretarea rezultatelor trebuie să fie confirmată de către un patolog sau un profesionist cu calificare echivalentă, în asociere cu alte constatări de laborator. Acești reactivi oferă rezultate cu mai mul ț i parametri, calitative pentru antigenele de suprafa ț ă enumerate mai jos:

PROFILURI ClearLLab 10C

Laser albastru

Laser roșu

Laser violet

APC– A750 PB KRO

PN

Eprubetă

FITC PE ECD PC5.5 PC7 APC APC– A700

B96805 Eprubetă celule B

Kappa Lambda CD10 CD5 CD200 CD34 CD38 CD20 CD19 CD45

B96806 Eprubetă celule T

CD4 CD2 CD56 CD5 CD34 CD7

CD8 CD3 CD45

TCR γδ

B96807 Eprubetă celule M1

CD16

CD7

CD10 CD13 CD64 CD34 CD14 HLA-DR CD11b CD45

B96808 Eprubetă celule M2

CD15 CD123 CD117 CD13 CD33 CD34 CD38 HLA-DR CD19 CD45

Fiecare eveniment contează

4

Beckman Coulter • Profiluri ClearLLab 10C • C33368 AB

SET DE COMPENSARE ClearLLab

Laser albastru

Laser roșu

Laser violet

APC– A750 PB KRO

PN

FITC

PE

ECD PC5.5

PC7

APC APC– A700

B74074

CD4

CD4

CD3

CD4

CD4

CD4

CD4

CD4

CD4

CD8

Reactivul de mai sus este furnizat într-un format standardizat pentru a fi utilizat cu reactivi pentru pregătirea probelor și setarea citometrului, împreună cu software pentru achizi ț ia și analiza datelor. Profilurile ClearLLab 10C îndeplinesc recomandările pentru standardizare specificate în orientările Bethesda 2 . Informa ț ii suplimentare privind profilurile ClearLLab 10C sunt disponibile la beckman.com/ClearLLab . SELECTAREA ȘI INTERPRETAREA CAZURILOR

Datele prezentate în acest registru de cazuri au fost generate urmându-se procedura detaliată în documentul ClearLLab 10C Panel Instructions For Use (IFU) (Instruc ț iuni de utilizare (IU) pentru profilurile ClearLLab 10C) disponibil la beckman.com .

Cazurile reprezentative au fost selectate din date din studii clinice și au fost revizuite, adnotate și interpretate de:

Brent Wood MD PhD Professor, Laboratory Medicine and Pathology Division Head, Hematopathology Director, Hematopathology Laboratory and SCCA Pathology Medical Director, SCCA Laboratories University of Washington, Seattle, WA, USA

Xueyan Chen, MD, PhD Assistant Professor, Laboratory Medicine Associate Director, Hematopathology Laboratory University of Washington, Seattle, WA

Yi Zhou, MD PhD Assistant Professor

Department of Laboratory Medicine University of Washington, Seattle, WA

Protocoale de analiză: Descărca ț i protocolul de analiză ClearLLab 10C. Analiză: Descărca ț i fișierele de analiză Kaluza C specifice cazurilor.

Fiecare eveniment contează

5

Beckman Coulter • Profiluri ClearLLab 10C • C33368 AB

REFERINȚE 1. Flow Cytometric Immunophenotyping for Hematologic Neoplasms. F.E. Craig, K.A. Foon. Blood. 2008; 111; 3941-3967. 2. Swerdlow SH, Campo E, Harris NL, Jaffe EA, Pileri SA, Stain H, Thiele J, & Vardiman JW (eds) (2008) WHO Classification of Tumors of Haematopoietic and Lymphoid Tissues. IARC Press: Lyon 3. The 2016 revision of the World Health Organization classification of lymphoid neoplasms. Swerdlow SH, et al. Blood. 2016;127:2375-90. 4. The 2016 revision of the World Health Organization classification of myeloid neoplasms and acute leukemia. Arber DA, et al. Blood 2016 127:2391-2405. 5. 2006 Bethesda International Consensus recommendations on the immunophenotypic analysis of hematolymphoid neoplasia by flow cytometry: optimal reagents and reporting for the flow cytometric diagnosis of hematopoietic neoplasia. Wood BL, Arroz M, Barnett D, DiGiuseppe J, Greig B, Kussick SJ, Oldaker T, Shenkin M, Stone E, Wallace P. Cytometry B Clin Cytom. 2007;72 Suppl 1:S14-22 6. 2006 Bethesda International Consensus recommendations on the flow cytometric immunophenotypic analysis of hematolymphoid neoplasia: medical indications. Davis BH, Holden JT, Bene MC, Borowitz MJ, Braylan RC, Cornfield D, Gorczyca W, Lee R, Maiese R, Orfao A, Wells D, Wood BL, Stetler-Stevenson M. Cytometry B Clin Cytom. 2007;72 Suppl 1:S5-13 7. 2006 Bethesda International Consensus Conference on Flow Cytometric Immunophenotyping of Hematolymphoid Neoplasia. Stetler-Stevenson M, Davis B, Wood B, Braylan R. Cytometry B Clin Cytom. 2007;72 Suppl 1:S3 8. Validation of cell-based fluorescence assays: practice guidelines from the ICSH and ICCS - part III - analytical issues. Tanqri S, Vall H, Kaplan D, Hoffman B, Purvis N, Porwit A, Hunsberger B, Shankey TV; ICSH/ICCS Working Group. Cytometry B Clin Cytom. 2013 Sep-Oct;84(5):291-308. doi: 10.1002/cyto.b.21106 9. Validation of cell-based fluorescence assays: practice guidelines from the ICSH and ICCS - part IV - postanalytic considerations. Barnett D, Louzao R, Gambell P, De J, Oldaker T, Hanson CA; ICSH/ICCS Working Group. Cytometry B Clin Cytom. 2013 Sep-Oct;84(5):309-14. doi: 10.1002/cyto.b.21107 10. Validation of cell-based fluorescence assays: practice guidelines from the ICSH and ICCS - part V - assay performance criteria. Wood B, Jevremovic D, Béné MC, Yan M, Jacobs P, Litwin V; ICSH/ICCS Working Group. Cytometry B Clin Cytom. 2013 Sep-Oct;84(5):315-23. doi: 10.1002/cyto.b.2110 DOCUMENTE CONEXE • ClearLLab 10C Application System Guide (Ghid de sistem pentru aplica ț ii Clearlab 10C), PN C28534AA • Navios Flow Cytometer Instructions For Use (Instruc ț iuni de utilizare pentru software-ul de citometrie în flux Kaluza C), PN C20168 • Navios Flow Cytometer Instructions For Use (Instruc ț iuni de utilizare pentru citometrul în flux Navios), PN B82804AC • Navios EX Flow Cytometer Instructions For Use (Instruc ț iuni de utilizare pentru citometrul în flux Navios EX), PN B77124AB • ClearLLab 10C Panels Instructions For Use (Instruc ț iuni de utilizare pentru profilurile ClearLLab 10C), PN C00197 • ClearLLab Compensation Beads Instructions For Use (Instruc ț iuni de utilizare pentru ClearLLab Compensation Beads), PN C00201 • ClearLLab Compensation Beads Instructions For Use (Instruc ț iuni de utilizare pentru setul de compensare ClearLLab), PN B74074 • ClearLLab Control Cells Instructions For Use (Instruc ț iuni de utilizare pentru ClearLLab Control Cells), PN B99884 • ClearLLab Control Cells QC Analysis Protocols Download Addendum (Anexă privind descărcarea protocolului de analiză QC pentru ClearLLab Control Cells), PN C33276AA

Fiecare eveniment contează

6

Beckman Coulter • Profiluri ClearLLab 10C • C33368 AB

CAZURI

Cazurilor li se aplică următorul Gating de preceden ț ă a culorilor:

Limfocite (poarta Ly)/Celule NK: roșu Celule B CD19+: portocaliu Celule T CD3+: aqua

Monocite (poarta Mo): verde Granulocite (poarta Gr): albastru

CD45dim: violet Populații aberante adiționale: turcoaz Populație negativă pentru CD45; gri

NICIO ANOMALIE LA IMUNOFENOTIPARE Citometria în flux este un mijloc de caracterizare a popula ț iilor de leucocite. Aceasta poate ajuta la diagnosticarea diferen ț iată a pacien ț ilor anormali din punct de vedere hematologic care au sau sunt suspecta ț i că au neoplazie hematopoietică, inclusiv leucemie cronică, leucemie acută, limfom non-Hodgkin, mielom, sindrom mielodisplazic (MDS) și/sau neoplasme mieloproliferative (MPN). Crucială pentru identificarea popula ț iilor aberante în aceste situa ț ii clinice este familiaritatea cu popula ț iile celulare normale prezente în probe de sânge integral, măduvă osoasă și ț esut de ganglioni limfatici. Următoarele sunt exemple de probe normale colorate cu profiluri ClearLLab 10C.

SÂNGE INTEGRAL PERIFERIC Cazul 1: Sânge integral normal

Etichetă clinică

Acest bărbat de 65 de ani prezintă trombocitopenie. Este furnizată o probă de sânge periferic integral pentru imunofenotiparea prin citometrie în flux folosind profilurile ClearLLab 10C.

Imunofenotiparea prin citometrie în flux

Eprubetă celule B

Figura 1: Această diagramă de puncte Time (Timp) versus CD45 este fără gating și include toate evenimente colectate secven ț ial. Scopul diagramei este să evalueze perturba ț ia fluidică la achizi ț ia probelor. Achizi ț ia stabilă este reprezentată printr-un model uniform al evenimentelor în timp. Evenimentele care deviază de la modelul stabil pot fi excluse în poarta Time (Timp).

Figura 2: Această diagramă de puncte FS INT versus FS PEAK este o reprezentare a evenimentelor dinpoarta Time (Timp). Scopul diagramei este să excludă duble ț ii celulari sau agregările. Evenimentele singlet prezintă o rela ț ie liniară pentru INT versus PEAK și sunt incluse în poarta Singlets (Single ț i), unde duble ț ii se află în afara rela ț iei liniare.

Cuprins > Nicio anomalie la imunofenotipare > Cazul 1: Sânge integral normal

Fiecare eveniment contează

7

Beckman Coulter • Profiluri ClearLLab 10C • C33368 AB

Eprubetă celule B

Figura 3: Această diagramă de puncte Side Scatter (Dispersie laterală) versus Forward Scatter (Dispersie frontală) ilustrează evenimentele din poarta Singlets (Single ț i). Scopul diagramei este acela de a exclude reziduurile celulare, care, în general, au o dispersie frontală scăzută. Celulele apoptotice timpurii prezintă, de asemenea, o dispersie frontală ușor crescută, în timp ce celulele apopototice târzii și cele necrotice prezintă o dispersie laterală ușor crescută. Celulele viabile sunt incluse în poarta Cells (Celule).

Figura 4: Această diagramă de puncte CD45 versus Side Scatter (Dispersie laterală) ilustrează evenimentele din poarta Cells (Celule). Scopul acestei diagrame este acela de a eviden ț ia diferitele subseturi de leucocite al căror gating este pozitiv pentruCD45. Popula ț iile negative pentru CD45 includ, în general, eritrocite, agregate trombocitare, reziduuri tisulare sau celule non-hematopoietice.

Figura 5: Această diagramă de puncte CD45 versus Side Scatter (Dispersie laterală) ilustrează evenimentele din poarta CD45+. Diagrama de puncte permite o distinc ț ie între mai multe popula ț ii de limfocite care se regăsesc în general în probele de sânge periferic, măduvă osoasă și ganglioni limfatici, inclusiv limfocite (Poarta Ly, roșu/ portocaliu), monocite (Poarta Mo, verde) și granulocite (Poarta Gr, albastru). Poarta CD45dim (violet) acoperă zona ocupată în general de celulele precursoare timpurii, adică mieloblastele și celulele B imature. În această zonă pot apărea și bazofilele, celulele dendritice plasmocitoide, celulele plasmatice și celulele NK. Aplicarea unor culori diferite evenimentelor aferente fiecărei por ț i permite identificarea diferitelor popula ț ii pe parcursul analizei.

Figura 6: Această diagramă de puncte CD19 versus Side Scatter (Dispersie laterală) ilustrează evenimentele din poarta Cells (Celule). Poarta CD19+ identifică celulele pozitive pentru CD19. CD19 se exprimă pe celulele B mature și imature, precum și pe majoritatea celulelor plasmatice. În general, aceste celule au o dispersie laterală scăzută spre moderată.

Cuprins > Nicio anomalie la imunofenotipare > Cazul 1: Sânge integral normal

Fiecare eveniment contează

8

Beckman Coulter • Profiluri ClearLLab 10C • C33368 AB

Eprubetă celule B

Figura 7: Această diagramă de puncte Kappa versus Side Scatter (Dispersie laterală) ilustrează celulele viabile. Lan ț ul ușor Kappa de suprafa ț ă se exprimă pe celulele B mature (portocaliu) și celulele B imature târzii. Propor ț ia celulelor B pozitive pentru Kappa este, în mod normal, mai mare decât cea a celulelor B negative pentru Kappa (pozitive pentru Lambda). O pozitivitate Kappa aparentă se observă pe monocite (verde) din cauza legării imunoglobulinei mediată de receptorul Fc. Celulele pozitive pentru lan ț ul ușor Kappa sunt reprezentate în partea dreaptă a diagramei.

Figura 8: Această diagramă de puncte Lambda versus Side Scatter (Dispersie laterală) ilustrează toate celulele viabile. Lan ț ul ușor Lambda de suprafa ț ă se exprimă pe celulele Bmature (portocaliu) și celulele B imature târzii. Propor ț ia celulelor B pozitive pentru Lambda este, înmod normal, mai mare decât cea a celulelor B negative pentru Lambda (pozitive pentru Kappa). O pozitivitate Lambda aparentă se observă pe monocite (verde) din cauza legării imunoglobulinei mediată de receptorul Fc. Celulele pozitive pentru lan ț ul ușor Lambda sunt reprezentate în partea dreaptă a diagramei.

Figura 9: Această diagramă de puncte CD10 versus Side Scatter (Dispersie laterală) ilustrează toate celulele viabile. CD10 se exprimă pe celulele B imature, celulele B mature din centrul germinativ și granulocitele mature (albastru). Granulocitele prezintă o dispersie laterală ridicată, spre deosebire de celulele limfoide care prezintă o dispersie laterală scăzută.

Figura 10: Această diagramă de puncte CD5 versus Side Scatter (Dispersie laterală) ilustrează toate celulele viabile. CD5 se exprimă pe celulele T imature și mature (roșu, dreapta-jos) și la nivel scăzut într-un subset de celule B mature (portocaliu). Aceste celule limfoide au o dispersie laterală scăzută.

Cuprins > Nicio anomalie la imunofenotipare > Cazul 1: Sânge integral normal

Fiecare eveniment contează

9

Beckman Coulter • Profiluri ClearLLab 10C • C33368 AB

Eprubetă celule B

Figura 11: Această diagramă de puncte CD200 versus Side Scatter (Dispersie laterală) ilustrează toate celulele viabile. În general, CD200 se exprimă pe celulele B, însă este negativ în cazul anumitor celule B neoplazice. Este util cu precădere pentru a distinge între limfomul cu celule în manta (în general, negativ pentru CD200) și leucemia limfocitară cronică/limfomul limfocitar mic (în general, pozitiv pentru CD200).

Figura 12: Această diagramă de puncte CD34 versus Side Scatter (Dispersie laterală) ilustrează toate celulele viabile. CD34 este un marker al celulelor progenitoare hematopoietice timpurii. Se exprimă pe celulele stem hematopoietice, celulele progenitoaremieloide timpurii (mieloblaste) și pe celulele B și T imature (limfoblaste). Granulocitele mature, monocitele și limfocitele sunt negative pentru CD34. Celulele progenitoare pozitive pentruCD34 reprezintă, înmod normal, sub0,01%din leucocitele din sângele periferic.

Figura 13: Această diagramă de puncte CD38 versus Side Scatter (Dispersie laterală) ilustrează toate celulele viabile. CD38 este unmarker de activare. Se exprimă la cel mai înalt nivel pe celulele plasmatice, la nivel moderat pe celulele progenitoare mieloide imature și pe celulele progenitoare limfoide, la nivel redus pe monocite (verde) și la nivel variabil pe limfocitele mature activate.

Figura 14: Această diagramă de puncte CD20 versus Side Scatter (Dispersie laterală) ilustrează toate celulele viabile. CD20 se exprimă pe celulele B mature (portocaliu) și la un nivel redus variabil pe un subset de celule T mature. Prezintă o exprimare variabilă pe celulele B imature târzii. Celulele pozitive pentru CD20 sunt, în general, în poarta Ly (Limfocite), cu dispersie laterală redusă.

Cuprins > Nicio anomalie la imunofenotipare > Cazul 1: Sânge integral normal

Fiecare eveniment contează

10

Beckman Coulter • Profiluri ClearLLab 10C • C33368 AB

Eprubetă celule B

Figura 15. Această diagramă de puncte Lambda versus Kappa ilustrează toate celulele CD19+. Celulele B imature timpurii (violet) nu exprimă lan ț uri ușoare de imunoglobulină de suprafa ț ă, fiind, prin urmare, negative atât pentru lan ț ul ușor Kappa, cât și Lambda. Celulele Bmature sunt policlonale, exprimând fie un lan ț ușor Kappa, fie un lan ț ușor Lambda. Procentul Kappa fa ț ă de Lambda este, în mod normal, de 1,4, cu un interval cuprins între 1 și 2. Creșterea mediului din cauza imunoglobulinei plasmatice aderente este frecvent întâlnită.

Figura 16. Diagrama de puncte CD19 versus CD20 ilustrează toate celulele din poarta Ly (Limfocite). Celulele B mature exprimă atât CD19, cât și CD20 (portocaliu). Unele celule B neoplazice pot prezenta o exprimare CD19 sau CD20 redusă.

Figura 17. Diagrama de puncte CD19 versus CD10 ilustrează toate celulele din poarta Ly (Limfocite). Celulele B sunt pozitive pentru CD19 (portocaliu). Celulele B mature pozitive pentru CD10 sunt distribuite în centre germinale din ganglionii limfatici și un subset redus de celule B imature târzii se regăsesc în sângele periferic și în aspiratele de măduvă osoasă.

Figura 18. Diagrama de puncte CD38 versus CD10 ilustrează toate celulele din poarta Ly (Limfocite). CD38 se exprimă la cel mai înalt nivel pe celulele plasmatice, la nivel moderat pe celulele B imature și la un nivel redus pe celulele B din centrul germinal. Majoritatea celulelor B mature (portocaliu) prezintă o exprimare redusă spre absentă a CD38. Celulele T (roșu) prezintă o exprimare CD38 variabilă, în func ț ie de starea de activare.

Cuprins > Nicio anomalie la imunofenotipare > Cazul 1: Sânge integral normal

Fiecare eveniment contează

11

Beckman Coulter • Profiluri ClearLLab 10C • C33368 AB

Eprubetă celule B

Figura 19. Diagrama de puncte CD20 versus CD10 ilustrează toate celulele din poarta Ly (Limfocite). Majoritatea celulelor B mature exprimă uniform CD20 la nivel crescut fără CD10.

Figura 20. Diagrama de puncte CD19 versus CD5 ilustrează toate celulele din poarta Ly (Limfocite). CD5 se exprimă pe celulele T (roșu, stânga-sus), cu exprimare variabilă la nivel redus pe un subset de celule B (portocaliu) și cu exprimare pe anumite subtipuri de celule B neoplazice.

Figura 22. Diagrama de puncte CD5 versus CD200 ilustrează toate celulele din poarta Ly (Limfocite). Majoritatea celulelor B mature exprimă, în general, CD200 cu un subset cu exprimare variabilă de CD5. Celulele B neoplazice în cazul leucemiei limfocitare cronice/limfomului limfocitar mic exprimă, în general CD5 și CD200, în timp ce limfomul cu celule în manta exprimă, în general CD5, dar nu și CD200.

Figura 21. Diagrama de puncte CD20 versus CD200 ilustrează toate celulele din poarta Ly (Limfocite). Majoritatea celulelor B mature (portocaliu) exprimă CD200 la nivel redus spre moderat.

Cuprins > Nicio anomalie la imunofenotipare > Cazul 1: Sânge integral normal

Fiecare eveniment contează

12

Beckman Coulter • Profiluri ClearLLab 10C • C33368 AB

Eprubetă celule T

Figura 1: Această diagramă de puncte Time (Timp) versus CD45 este fără gating și include toate evenimente colectate secven ț ial. Scopul diagramei este să evalueze perturba ț ia fluidică la achizi ț ia probelor. Achizi ț ia stabilă este reprezentată printr-un model uniform al evenimentelor în timp. Evenimentele care deviază de la modelul stabil pot fi excluse în poarta Time (Timp).

Figura 2: Această diagramă de puncte FS INT versus FS PEAK este o reprezentare a evenimentelor dinpoarta Time (Timp). Scopul diagramei este să excludă duble ț ii celulari sau agregările. Evenimentele singlet prezintă o rela ț ie liniară pentru INT versus PEAK și sunt incluse în poarta Singlets (Single ț i), unde duble ț ii se află în afara rela ț iei liniare.

Figura 3: Această diagramă de puncte Side Scatter (Dispersie laterală) versus Forward Scatter (Dispersie frontală) ilustrează evenimentele din poarta Singlets (Single ț i). Scopul diagramei este acela de a exclude reziduurile celulare, care, în general, au o dispersie frontală scăzută și o dispersie laterală crescută. Celulele apoptotice timpurii prezintă, de asemenea, o dispersie frontală ușor crescută, în timp ce celulele apopototice târzii și cele necrotice prezintă o dispersie laterală ușor crescută. Celulele viabile sunt incluse în poarta Cells (Celule).

Figura 4: Această diagramă de puncte CD45 versus Side Scatter (Dispersie laterală) ilustrează evenimentele din poarta Cells (Celule). Scopul acestei diagrame este acela de a eviden ț ia diferitele tipuri de leucocite pozitive pentru CD45. Popula ț iile negative pentru CD45 includ, în general, eritrocite, agregate trombocitare sau celule non-hematopoietice.

Cuprins > Nicio anomalie la imunofenotipare > Cazul 1: Sânge integral normal

Fiecare eveniment contează

13

Beckman Coulter • Profiluri ClearLLab 10C • C33368 AB

Eprubetă celule T

Figura 5: Această diagramă de puncte CD45 versus Side Scatter (Dispersie laterală) ilustrează evenimentele din poarta CD45+. Diagrama de puncte permite o distinc ț ie între mai multe popula ț ii de limfocite care se regăsesc în general în probele de sânge periferic, măduvă osoasă și ganglioni limfatici, inclusiv limfocite (Poarta Ly, roșu/aqua), monocite (Poarta Mo, verde) și granulocite (Poarta Gr, albastru). Poarta CD45dim (violet) acoperă zona ocupată în general de mieloblaste și celulele B imature. În această zonă pot apărea și bazofilele, celulele plasmatice și celulele NK. Aplicarea unor culori diferite evenimentelor aferente fiecărei por ț i permite monitorizarea diferitelor popula ț ii pe parcursul analizei.

Figura 6: Această diagramă de puncte CD3 versus Side Scatter (Dispersie laterală) ilustrează toate celulele viabile. Poarta CD3+ identifică celule cu exprimare CD3 de suprafa ț ă (aqua). CD3 este foarte specific pentru celulele T, exprimându-se doar la suprafa ț a celulelor T mature și a celulelor T imature târzii. În general, aceste celule au o dispersie laterală scăzută spre moderată.

Figura 8: Această diagramă de puncte CD4 versus Side Scatter (Dispersie laterală) ilustrează toate celulele viabile. CD4 se exprimă pe un subset de celule T imature și mature la nivel ridicat (aqua). CD4 se exprimă și pe celulele monocite (verde) la un nivel mai redus decât cel al celulelor T pozitive pentru CD4.

Figura 7: Această diagramă de puncte TCR γδ versus Side Scatter (Dispersie laterală) ilustrează toate celulele viabile. TCR γδ este o subunitate a receptorului de celule T și se exprimă pe un subset redus de celule T citotoxice. În general, aceste celule au o dispersie laterală scăzută (aqua).

Cuprins > Nicio anomalie la imunofenotipare > Cazul 1: Sânge integral normal

Fiecare eveniment contează

14

Beckman Coulter • Profiluri ClearLLab 10C • C33368 AB

Eprubetă celule T

Figura 10: Această diagramă de puncte CD56 versus Side Scatter (Dispersie laterală) ilustrează toate celulele viabile. CD56 se exprimă în mod normal pe un subset important de celule NK (roșu), celule T cu activitate naturală ucigașă (celule NK/T) și pe numeroase celule T gamma/delta (aqua). De asemenea, CD56 se exprimă par ț ial pe celulele monocite (verde), atât în condi ț ii reactive, cât și neoplazice.

Figura 9: Această diagramă de puncte CD2 versus Side Scatter (Dispersie laterală) ilustrează toate celulele viabile. CD2 este un antigen exprimat de aproape toate celulele T imature și mature (aqua). CD2 se exprimă și pe celulele NK (roșu, dreapta- jos) și la un nivel mai redus pe monocite (verde).

Figura 12: Această diagramă de puncte CD34 versus Side Scatter (Dispersie laterală) ilustrează toate celulele viabile. CD34 este un marker al celulelor progenitoare hematopoietice timpurii. Se exprimă pe celulele stem hematopoietice, celulele progenitoaremieloide timpurii (mieloblaste) și pe celulele B și T imature (limfoblaste). Granulocitele mature, monocitele și limfocitele sunt negative pentru CD34. Celulele progenitoare pozitive pentruCD34 reprezintă, înmod normal, sub0,01%din leucocitele din sângele periferic.

Figura 11: Această diagramă de puncte CD5 versus Side Scatter (Dispersie laterală) ilustrează toate celulele viabile. CD5 se exprimă pe majoritatea celulelor T imature și mature (aqua) și la un nivel redus pe un subset de celule B mature. Celulele T imature foarte timpurii și celulele T gamma/delta au, în general, o exprimare CD5 redusă spre zero. Un subset redus de celule NK exprimă CD5.

Cuprins > Nicio anomalie la imunofenotipare > Cazul 1: Sânge integral normal

Fiecare eveniment contează

15

Beckman Coulter • Profiluri ClearLLab 10C • C33368 AB

Eprubetă celule T

Figura 13: Această diagramă de puncte CD7 versus Side Scatter (Dispersie laterală) ilustrează toate celulele viabile. CD7 se exprimă pe celulele T imature în etapa timpurie a dezvoltării celulelor T și persistă pe întreg parcursul procesului de maturizare a celulelor T pentru a se exprima variabil pe celulele Tmature (aqua). De asemenea, se exprimă uniformpe celulele NK (roșu, dreapta-jos), prezentând o exprimare slabă pe un subset de celule dendritice plasmocitoide și pe un subset de celule progenitoare pozitive pentru CD34 angajate în filia ț ie.

Figura 14: Această diagramă de puncte CD8 versus Side Scatter (Dispersie laterală) ilustrează toate celulele viabile. CD8 se exprimă pe un subset de celule T imature și mature (aqua) și definește popula ț ia de celule T mature citotoxice. Se exprimă variabil la un nivel redus pe celulele NK și celulele T gamma-delta.

Figura 15. Diagrama de puncte CD3 versus CD56 ilustrează toate celulele din poarta Ly (Limfocite). Celulele T sunt definite de exprimarea CD3, întrucât aceasta este prezentă pe toate celulele T mature și nu este exprimată de celulele din alte filia ț ii. Prin defini ț ie, celulele NK nu exprimă CD3 de suprafa ț ă, însă exprimă CD56 pe un subset major (roșu, stânga-sus). Subseturi reduse de celule T mature exprimă, de asemenea, CD56, cu precădere celulele T cu activitate ucigașă naturală (celule NK/T) și celulele T gamma-delta.

Figura 16. Diagrama de puncte CD5 versus CD3 ilustrează toate celulele din poarta Ly (Limfocite). Coexprimarea CD3 și CD5 se întâlnește pe majoritatea celulelor T mature (aqua), deși un subset redus de celule T citotoxice cu omorfologie cu limfocite mari granulare prezintă adesea o exprimare redusă spre absentă a CD5. CD5 nu se exprimă pe majoritatea celulelor NK.

Cuprins > Nicio anomalie la imunofenotipare > Cazul 1: Sânge integral normal

Fiecare eveniment contează

16

Beckman Coulter • Profiluri ClearLLab 10C • C33368 AB

Eprubetă celule T

Figura 18. Diagrama de puncte CD8 versus CD4 ilustrează toate celulele din poarta Ly (Limfocite). Celulele T pozitive pentru CD3 (aqua) con ț in subseturi pozitive pentru CD4 (helper) și pentru CD8 (citotoxice). Celulele T pozitive pentru CD4 depășesc, în general, numărul celulelor T pozitive pentru CD8 cu un raport CD4:CD8 de 1:1 până la 4:1 în sângele periferic. Celulele T dublu negative sau dublu pozitive pentru CD4 și CD8 sunt, de asemenea, prezente. În general, celulele T dublu negative constau în mare pare din celule T gamma/delta. Trebuie men ț ionat că celulele pozitive pentru CD4, însă negative pentru CD3 (roșu, stânga-mijloc) sunt monocite incluse în poarta Ly (Limfocite). Aceasta demonstrează că gating-ul CD45 versus Side scatter (Dispersie laterală) este insuficient pentru a permite identificarea limfocitelor pure.

Figura 17. Diagrama de puncte CD7 versus CD2 ilustrează toate celulele din poarta Ly (Limfocite). Coexprimarea CD2 și CD7 se întâlnește pe majoritatea celulelor T mature (aqua) și în celulele NK (roșu, dreapta-sus).

Figura 19. Diagrama de puncte CD3 versus CD4 ilustrează toate celulele din poarta Ly (Limfocite). Toate celulele T pozitive pentru CD4 exprimă CD3. Monocitele și celulele dendritice plasmocitoide exprimă CD4 la un nivel mai redus decât celulele T pozitive pentru CD4 și nu prezintă exprimare de CD3. Exprimarea CD3 și CD4 nu se întâlnește pe celulele NK.

Figura 20. Diagrama de puncte CD3 versus CD8 ilustrează toate celulele din poarta Ly (Limfocite). Toate celulele T pozitive pentru CD8 exprimă CD3 (aqua). Un subset restrâns de celule NK exprimă, de asemenea, CD8 (roșu, stânga-sus) fără CD3.

Cuprins > Nicio anomalie la imunofenotipare > Cazul 1: Sânge integral normal

Fiecare eveniment contează

17

Beckman Coulter • Profiluri ClearLLab 10C • C33368 AB

Eprubetă celule T

Figura 21. Diagrama de puncte CD3 versus TCR γδ ilustrează toate celulele din poarta Ly (Limfocite). Un subset redus de celule T exprimă TCR gamma/delta, care se coexprimă cu CD3. Legătura cu grad crescut de liniaritate dintre CD3 și TCR se datorează prezen ț ei acestora ca și complex heterodimer cu un raport fix de 1:1; prin urmare,exprimareacrescutăaunuiadintreacestea indicăoprezen ț ăcrescutăaceluilalt.

Cuprins > Nicio anomalie la imunofenotipare > Cazul 1: Sânge integral normal

Fiecare eveniment contează

18

Beckman Coulter • Profiluri ClearLLab 10C • C33368 AB

Eprubetă celule M1

Figura 1: Această diagramă de puncte Time (Timp) versus CD45 este fără gating și include toate evenimente colectate secven ț ial. Scopul diagramei este să evalueze perturba ț ia fluidică la achizi ț ia probelor. Achizi ț ia stabilă este reprezentată printr-un model uniform al evenimentelor în timp. Evenimentele care deviază de la modelul stabil pot fi excluse în poarta Time (Timp).

Figura 2: Această diagramă de puncte FS INT versus FS PEAK este o reprezentare a evenimentelor dinpoarta Time (Timp). Scopul diagramei este să excludă duble ț ii celulari sau agregările. Evenimentele singlet prezintă o rela ț ie liniară pentru INT versus PEAK și sunt incluse în poarta Singlets (Single ț i), unde duble ț ii se află în afara rela ț iei liniare.

Figura 4: Această diagramă de puncte CD45 versus Side Scatter (Dispersie laterală) ilustrează evenimentele din poarta Cells (Celule). Scopul acestei diagrame este acela de a eviden ț ia diferitele subseturi de leucocite al căror gating este pozitiv pentruCD45. Popula ț iile negative pentru CD45 includ, în general, eritrocite, agregate trombocitare, reziduuri tisulare sau celule non-hematopoietice.

Figura 3: Această diagramă de puncte Side Scatter (Dispersie laterală) versus Forward Scatter (Dispersie frontală) ilustrează evenimentele din poarta Singlets (Single ț i). Scopul diagramei este acela de a exclude reziduurile celulare, care, în general, au o dispersie frontală scăzută și o dispersie laterală crescută. Celulele apoptotice timpurii prezintă, de asemenea, o dispersie frontală ușor crescută, în timp ce celulele apopototice târzii și cele necrotice prezintă o dispersie laterală ușor crescută. Celulele viabile sunt incluse în poarta Cells (Celule).

Cuprins > Nicio anomalie la imunofenotipare > Cazul 1: Sânge integral normal

Fiecare eveniment contează

19

Beckman Coulter • Profiluri ClearLLab 10C • C33368 AB

Eprubetă celule M1

Figura 5: Această diagramă de puncte CD45 versus Side Scatter (Dispersie laterală) ilustrează evenimentele din poarta CD45+. Diagrama de puncte permite o distinc ț ie între mai multe popula ț ii de limfocite care se regăsesc în general în probele de sânge periferic, măduvă osoasă și ganglioni limfatici, inclusiv limfocite (Poarta Ly, roșu), monocite (Poarta Mo, verde) și granulocite (Poarta Gr, albastru). Poarta CD45dim (violet) acoperă zona ocupată în general de mieloblaste și celulele B imature. În această zonă pot apărea și bazofilele, celulele plasmatice și celulele NK. Aplicarea unor culori diferite evenimentelor aferente fiecărei por ț i permite monitorizarea diferitelor popula ț ii pe parcursul analizei.

Figura 6: Această diagramă de puncte CD16 versus Side Scatter (Dispersie laterală) ilustrează toate celulele viabile. CD16 se exprimă la cel mai ridicat nivel pe granulocite mature (albastru). Majoritatea celulelor NK exprimă CD16 (roșu, dreapta-jos), la fel ca și un subset de monocite activate (verde).

Figura 8: Această diagramă de puncte CD10 versus Side Scatter (Dispersie laterală) ilustrează toate celulele viabile. CD10 se exprimă pe celulele B imature, celulele B mature din centrul germinativ și granulocitele mature (albastru). Granulocitele prezintă o dispersie laterală ridicată, spre deosebire de celulele limfoide care prezintă o dispersie laterală scăzută.

Figura 7: Această diagramă de puncte CD7 versus Side Scatter (Dispersie laterală) ilustrează toate celulele viabile. CD7 se exprimă pe celulele T imature în etapa timpurie a dezvoltării celulelor T și persistă pe întreg parcursul procesului de maturizare a celulelor T pentru a se exprima variabil pe celulele T mature (roșu, dreapta-jos). De asemenea, se exprimă și pe celulele NK, prezentând o exprimare slabă pe un subset de celule dendritice plasmocitoide și pe un subset de celule progenitoare angajate în filia ț ie.

Cuprins > Nicio anomalie la imunofenotipare > Cazul 1: Sânge integral normal

Fiecare eveniment contează

20

Beckman Coulter • Profiluri ClearLLab 10C • C33368 AB

Eprubetă celule M1

Figura 9: Această diagramă de puncte CD13 versus Side Scatter (Dispersie laterală) ilustrează toate celulele viabile. CD13 se exprimă pe granulocite în curs dematurizare (albastru), monocite mature (verde) și celulele progenitoare mieloide (violet).

Figura 10: Această diagramă de puncte CD64 versus Side Scatter (Dispersie laterală) ilustrează toate celulele viabile. CD64 se exprimă la cel mai înalt nivel pe monocitele mature (verde). CD64 nu se exprimă pe granulocitele mature naive (albastru), însă exprimarea crește odată cu activarea granulocitelor. CD64 nu se exprimă pe limfocite (roșu) sau pe majoritatea celulelor progenitoare pozitive pentru CD34. Monocitele mature activate exprimă CD64 la nivel redus și au dispersie laterală redusă.

Figura 12: Această diagramă de puncte CD14 versus Side Scatter (Dispersie laterală) ilustrează toate celulele viabile. CD14 se exprimă la nivel ridicat pe monocite mature (verde) și la nivel redus pe granulocite mature (albastru). Monocitele mature activate exprimă CD14 la nivel redus și au dispersie laterală redusă.

Figura 11: Această diagramă de puncte CD34 versus Side Scatter (Dispersie laterală) ilustrează toate celulele viabile. CD34 este un marker al celulelor progenitoare hematopoietice timpurii. Se exprimă pe celulele stem hematopoietice, celulele progenitoaremieloide timpurii (mieloblaste) și pe celulele B și T imature (limfoblaste). Granulocitele mature, monocitele și limfocitele sunt negative pentru CD34. Celulele progenitoare pozitive pentru CD34 reprezintă, în mod normal, sub 0,01% din leucocitele din sângele periferic.

Cuprins > Nicio anomalie la imunofenotipare > Cazul 1: Sânge integral normal

Fiecare eveniment contează

21

Beckman Coulter • Profiluri ClearLLab 10C • C33368 AB

Eprubetă celule M1

Figura 13: Această diagramă de puncteHLA-DRversus Side Scatter (Dispersie laterală) ilustrează toate celulele viabile. HLA-DR se exprimă în celule care prezintă antigenul, inclusiv monocitele (verde) și celulele dendritice plasmocitoide. De asemenea, se exprimă pe celulele progenitoare pozitive pentru CD34, pe celulele B imature și mature și pe celulele T activate.

Figura 14: Această diagramă de puncte CD11b versus Side Scatter (Dispersie laterală) ilustrează toate celulele viabile. CD11b se exprimă pe granulocite (albastru) și pe monocite (verde). CD11b se exprimă și pe celulele NK și pe bazofile.

Figura 16. Această diagramă de puncte CD16 versus CD13 ilustrează toate celulele viabile. CD13 se exprimă pe granulocite (albastru), monocite (verde), bazofile și celulele progenitoare pozitive pentru CD34. CD16 se exprimă pe granulocitele în curs de maturizare (albastru) și pe un subset de celule NK (roșu, dreapta-jos).

Figura 15. Această diagramă de puncte CD11b versus CD16 ilustrează toate celulele viabile. CD11b se exprimă pe monocite (verde), pe granulocitele imature și mature (albastru) și pe celulele NK (roșu). CD16 se exprimă pe granulocitele imature și mature (albastru) și pe un subset de celuleNK (roșu, dreapta-sus). Monocitelemature activate exprimă CD16 la un nivel variabil și sunt pozitive pentru CD11b.

Cuprins > Nicio anomalie la imunofenotipare > Cazul 1: Sânge integral normal

Fiecare eveniment contează

22

Beckman Coulter • Profiluri ClearLLab 10C • C33368 AB

Eprubetă celule M1

Figura 17. Această diagramă de puncte CD13 versus CD34 ilustrează toate celulele viabile. CD13 se exprimă pe granulocite (albastru), monocite (verde), bazofile și celulele progenitoare pozitive pentruCD34. CD34 se exprimă pe celulele progenitoare hematopoietice timpurii. Granulocitelemature, monocitele și limfocitele sunt negative pentru CD34.

Figura 18. Această diagramă de puncte CD14 versus CD64 ilustrează toate celulele viabile. CD64 se exprimă la nivel ridicat pe monocite (verde) și la nivel redus pe granulocite (albastru). CD14 se exprimă la nivel ridicat pe monocite și la nivel redus pe granulocite (albastru). Monocitele mature activate exprimă CD14 și CD64 la un nivel variabil redus.

Figura 20. Această diagramă de puncte HLA-DR versus CD10 ilustrează toate celulele viabile. HLA-DR se exprimă pe monocite (verde), celule B, celule dendritice plasmocitoide și celulele progenitoare pozitive pentru CD34. CD10 se exprimă pe granulocite mature (albastru).

Figura 19. Această diagramă de puncte CD14 versus CD16 ilustrează toate celulele viabile. CD14 se exprimă la nivel ridicat pe monocite (verde) și la nivel redus pe granulocite (albastru, stânga-sus). CD16 se exprimă pe granulocite și pe un subset de celule NK (roșu, stânga-mijloc). Monocitele mature activate exprimă CD14 și CD16 la un nivel variabil redus.

Cuprins > Nicio anomalie la imunofenotipare > Cazul 1: Sânge integral normal

Fiecare eveniment contează

23

Beckman Coulter • Profiluri ClearLLab 10C • C33368 AB

Eprubetă celule M1

Figura 21. Această diagramă de puncte CD7 versus CD13 ilustrează toate celulele viabile. CD7 se exprimă pe celule T și celule NK (roșu, dreapta-jos). CD13 se exprimă pe granulocite (albastru), monocite (verde), bazofile și celulele progenitoare pozitive pentru CD34. În general, nu se întâlnește coexprimarea CD13 și CD7.

Cuprins > Nicio anomalie la imunofenotipare > Cazul 1: Sânge integral normal

Fiecare eveniment contează

24

Beckman Coulter • Profiluri ClearLLab 10C • C33368 AB

Eprubetă celule M2

Figura 1: Această diagramă de puncte Time (Timp) versus CD45 este fără gating și include toate evenimente colectate secven ț ial. Scopul diagramei este să evalueze perturba ț ia fluidică la achizi ț ia probelor. Achizi ț ia stabilă este reprezentată printr-un model uniform al evenimentelor în timp. Evenimentele care deviază de la modelul stabil pot fi excluse în poarta Time (Timp).

Figura 2: Această diagramă de puncte FS INT versus FS PEAK este o reprezentare a evenimentelor dinpoarta Time (Timp). Scopul diagramei este să excludă duble ț ii celulari sau agregările. Evenimentele singlet prezintă o rela ț ie liniară pentru INT versus PEAK și sunt incluse în poarta Singlets (Single ț i), unde duble ț ii se află în afara rela ț iei liniare.

Figura 4: Această diagramă de puncte CD45 versus Side Scatter (Dispersie laterală) ilustrează evenimentele din poarta Cells (Celule). Scopul acestei diagrame este acela de a eviden ț ia diferitele subseturi de leucocite al căror gating este pozitiv pentruCD45. Popula ț iile negative pentru CD45 includ, în general, eritrocite, agregate trombocitare, reziduuri tisulare sau celule non-hematopoietice.

Figura 3: Această diagramă de puncte Side Scatter (Dispersie laterală) versus Forward Scatter (Dispersie frontală) ilustrează evenimentele din poarta Singlets (Single ț i). Scopul diagramei este acela de a exclude reziduurile celulare, care, în general, au o dispersie frontală scăzută. Celulele apoptotice timpurii prezintă, de asemenea, o dispersie frontală ușor crescută, în timp ce celulele apopototice târzii și cele necrotice prezintă o dispersie laterală ușor crescută. Celulele viabile sunt incluse în poarta Cells (Celule).

Cuprins > Nicio anomalie la imunofenotipare > Cazul 1: Sânge integral normal

Fiecare eveniment contează

25

Beckman Coulter • Profiluri ClearLLab 10C • C33368 AB

Eprubetă celule M2

Figura 5: Această diagramă de puncte CD45 versus Side Scatter (Dispersie laterală) ilustrează evenimentele din poarta CD45+. Diagrama de puncte permite o distinc ț ie între mai multe popula ț ii de limfocite care se regăsesc în general în probele de sânge periferic, măduvă osoasă și ganglioni limfatici, inclusiv limfocite (Poarta Ly, roșu), monocite (Poarta Mo, verde) și granulocite (Poarta Gr, albastru). Poarta CD45dim (violet) acoperă zona ocupată în general de mieloblaste și celulele B imature. În această zonă pot apărea și bazofilele, celulele plasmatice și celulele NK. Aplicarea unor culori diferite evenimentelor aferente fiecărei por ț i permite monitorizarea diferitelor popula ț ii pe parcursul analizei.

Figura 6: Această diagramă de puncte CD15 versus Side Scatter (Dispersie laterală) ilustrează toate celulele viabile. CD15 se exprimă pe granulocite (albastru) și, la nivel mai redus, pe monocite (verde).

Figura 8: Această diagramă de puncte CD117 versus Side Scatter (Dispersie laterală) ilustrează toate celulele viabile. CD117 se exprimă variabil pe celulele progenitoare mieloide pozitive pentru CD34, celulele promielocite timpurii și celulele precursoare eritroide timpurii și la un nivel ridicat pe celulele mast. CD117 se exprimă pe subseturi de celule NK reactive și pe celulele plasmatice. Granulocitele mature, monocitele și limfocitele sunt negative la CD117.

Figura 7: Această diagramă de puncte CD123 versus Side Scatter (Dispersie laterală) ilustrează toate celulele viabile. CD123 se exprimă la nivel ridicat pe bazofile și celule dendritice plasmocitoide și la nivel mai redus pe celule progenitoare mieloide și monocite pozitive pentru CD34 (verde).

Cuprins > Nicio anomalie la imunofenotipare > Cazul 1: Sânge integral normal

Fiecare eveniment contează

26

Beckman Coulter • Profiluri ClearLLab 10C • C33368 AB