ClearLLab 10C - Versão checa

KOMBINACE CE PROTILÁTEK PRO ANALÝZU LEUKÉMIÍ/LYMFOMŮ* P ANELY C LEAR LL AB 10C

PŘEHLED PŘÍPADŮ

Na každé události záleží * Pouze non-Hodgkinský lymfom

1

Beckman Coulter • Panely ClearLLab 10C • C33359 AB

OBSAH

ÚVOD..............................................................................................3 DOSAVADNÍ PRAXE..................................................................3 KONSENZUÁLNÍ DOPORUČENÍ PRO IMUNOFENOTYPIZACI..............................................................4 URČENÉ POUŽITÍ PANELŮ CLEARLLAB 10C....................4 PANELY CLEARLLAB 10C........................................................4 KOMPENZAČNÍ SOUPRAVA CLEARLLAB..........................5 VÝBĚR A INTERPRETACE PŘÍPADŮ.....................................5 SOUVISEJÍCÍ DOKUMENTY.....................................................6 LITERATURA................................................................................6 PŘÍPADY........................................................................................7 BEZ IMUNOFENOTYPICKÝCH ABNORMALIT...................7 PLNÁ PERIFERNÍ KREV......................................................... 7 Případ č. 1: Normální plná krev........................................7 KOSTNÍ DŘEŇ...........................................................................32 Případ č. 2: Normální kostní dřeň...............................32 LYMFATICKÁ UZLINA........................................................... 56 Případ č. 3: Normální lymfatická uzlina..................56 NEOPLASTICKÝ PROCES S PŮVODEM Z B-BUNĚK....80 LYMFOBLASTICKÁ LEUKÉMIE / LYMFOBLASTICKÝ LYMFOM Z B-BUNĚK..................80 Případ č. 4: Akutní lymfoblastická leukémie / lymfoblastický lymfom z B-buněk............................ 80 LYMFOBLASTICKÁ LEUKÉMIE / LYMFOBLASTICKÝ LYMFOM Z B-BUNĚK.................105 Případ č. 5: Akutní lymfoblastická leukémie / lymfoblastický lymfom z B-buněk...........................105 CHRONICKÁ LYMFOCYTÁRNÍ LEUKÉMIE / LYMFOM Z MALÝCH LYMFOCYTŮ................................130 Případ č. 6: Chronická lymfocytární leukémie / lymfom z malých lymfocytů.......................................130 CHRONICKÁ LYMFOCYTÁRNÍ LEUKÉMIE / LYMFOM Z MALÝCH LYMFOCYTŮ................................154 Případ č. 7: Chronická lymfocytární leukémie / lymfom z malých lymfocytů.......................................154 LYMFOM Z PLÁŠŤOVÝCH BUNĚK................................178 Případ č. 8: Lymfom z plášťových buněk............ 178 PLAZMOCELULÁRNÍ MYELOM.....................................202 Případ č. 9: Plazmocelulární myelom....................202 FOLIKULÁRNÍ LYMFOM....................................................226 Případ č. 10: Folikulární lymfom...............................226

LYMFOM Z B-BUNĚK POCHÁZEJÍCÍ ZE ZÁRODEČNÉHO CENTRA...............................................250 Případ č. 11: Lymfom z B-buněk pocházející ze zárodečného centra.......................250 LYMFOM ZE ZRALÝCH B-BUNĚK................................. 274 Případ č. 12: Lymfom ze zralých B-buněk.......... 274 LYMFOM ZE ZRALÝCH B-BUNĚK.................................298 Případ č. 13: Lymfom ze zralých B-buněk..........298 NEOPLASTICKÝ PROCES S PŮVODEM Z T-BUNĚK...322 LYMFOBLASTICKÁ LEUKÉMIE / LYMFOBLASTICKÝ LYMFOM Z T-BUNĚK.................322 Případ č. 14: Lymfoblastická leukémie z T-buněk / lymfoblastický lymfom z T-buněk...322 LYMFOBLASTICKÁ LEUKÉMIE / LYMFOBLASTICKÝ LYMFOM Z T-BUNĚK.................346 Případ č. 15: Lymfoblastická leukémie z T-buněk / lymfoblastický lymfom z T-buněk...346 LYMFOM Z VELKÝCH GRANULÁRNÍCH T-BUNĚK...................................................................................370 Případ č. 16: Lymfoproliferativní onemocnění z T-buněk.................................................370 LYMFOM Z VELKÝCH GRANULÁRNÍCH T-BUNĚK...................................................................................394 Případ č. 17: Lymfoproliferativní onemocnění z T-buněk.................................................394 NEOPLASTICKÝ PROCES MYELOIDNÍHO PŮVODU...418 AKUTNÍ MYELOIDNÍ LEUKÉMIE.....................................418 Případ č. 18: Akutní myeloidní leukémie...............418 AKUTNÍ MYELOIDNÍ LEUKÉMIE................................... 442 Případ č. 19: Akutní monocytární leukémie.......442 AKUTNÍ MYELOIDNÍ LEUKÉMIE................................... 466 Případ č. 20: Akutní myeloidní leukémie blíže nespecifikovaná (NOS).................................... 466 AKUTNÍ MYELOIDNÍ LEUKÉMIE...................................490 Případ č. 21: Akutní promyelocytární leukémie................................................................................490 AKUTNÍ MYELOIDNÍ LEUKÉMIE.....................................514 Případ č. 22: Akutní monocytární leukémie.......514 MYELODYSPLASTICKÝ SYNDROM.............................538 Případ č. 23: Myelodysplastický syndrom..........538 MYELODYSPLASTICKÝ SYNDROM.............................562 Případ č. 24: Myelodysplastický syndrom..........562

Na každé události záleží

2

Beckman Coulter • Panely ClearLLab 10C • C33359 AB

ÚVOD Tento přehled případů byl navržen jako pomůcka při analýze imunofenotypizačních dat získaných průtokovou cytometrií. Data byla vytvořena s použitím reagencií panelů ClearLLab 10C společnosti Beckman Coulter s označením CE-IVD určených pro analýzu leukémie a lymfomů na průtokových cytometrech Navios a Navios EX společnosti Beckman Coulter. Jsou zde zahrnuty ukázkové případy s charakteristickými nálezy, které jsou typické pro různé lymfoidní a myeloidní neoplazie, stejně jako případy pacientů s klinickými a/nebo laboratorními nálezy, které naznačují skrytý neoplastický proces, ale u kterých není zjištěna žádná imunofenotypová abnormalita. Typy vzorků zahrnují plnou periferní krev, kostní dřeň a lymfatické uzliny. Každý případ obsahuje stručný klinický přehled, který popisuje demografické údaje a anamnézu pacienta, dále datové soubory kompletních záznamů specifické pro případ, aby uživatel tohoto přehledu případů mohl provést opětovnou analýzu, dále protokoly analýzy specifické pro panely ClearLLab 10C, které se používají s daty kompletního záznamu, a dále výsledkový list ukazující analýzu s poskytnutými protokoly. Každý výsledkový list obsahuje poznámky k analýze, které zdůrazňují imunofenotypizační nálezy a možné záludnosti. POZNÁMKA: Příklady v přehledu případů jsou poskytovány pouze k ilustračním účelům a nemusejí v nich být zastoupeny všechny kategorie hematolymfoidních neoplazií ani popsány či charakterizovány všechny možné varianty imunofenotypizace. DOSAVADNÍ PRAXE Imunofenotypizace průtokovou cytometrií vyhodnocuje přítomnost nebo nepřítomnost specifických antigenů na každé jednotlivé buňce nacházející se ve vzorku. Dohromady tyto výsledky vytvářejí imunofenotypizační profil pro každou buňku, který buď odpovídá očekávané populaci (tzn. je normální), nebo je v rozporu s očekávanou populací v daném typu vzorku (tzn. je abnormální). Vyhodnocení vzorků od pacientů s podezřením na hematolymfoidní zhoubné nádory zahrnuje několik kroků 1 :

• Zhodnocení všech buněčných populací ve vzorku.

• Určení každé buněčné populace buď jako „normální“, nebo „abnormální“.

• Podrobná charakterizace abnormální populace v závislosti na přítomnosti nebo absenci antigenů a intenzivnější nebo méně intenzivní barvení pomocí protilátek značených fluorochromy. • Interpretace abnormálního imunofenotypu a zahrnutí dostupných dodatečných informací, jako například anamnézy, histologie, cytologie, imunohistochemie a genotypizačních studií, jako jsou hybridizace in situ, karyotypizace a molekulární diagnostika.

Na každé události záleží

3

Beckman Coulter • Panely ClearLLab 10C • C33359 AB

KONSENZUÁLNÍ DOPORUČENÍ PRO IMUNOFENOTYPIZACI Během posledních dvou desetiletí se objevila konsenzuální doporučení pro použití průtokové cytometrie k imunofenotypizaci vzorků od pacientů, u kterých existuje podezření nebo je známa přítomnost hematolymfoidních zhoubných nádorů. Několik zásad bylo publikováno v odborné literatuře. Imunofenotypizace průtokovou cytometrií je od roku 2008 obsažena v dokumentu WHO Classification of Tumors of Haematopoetic and Lymphoid Tissues (Klasifikace nádorů hematopoetických a lymfoidních tkání) 2 . Lékařské indikace a validace analýz pomocí průtokové cytometrie, včetně preanalytických, analytických a postanalytických podrobností o testování, jsou probírány v doporučeních mezinárodní konsenzuální konference Bethesda z roku 2006 3,4,5 a v praktických zásadách pro buněčná fluorescenční stanovení od ICSH/ICCS 6,7,8 . URČENÉ POUŽITÍ PANELŮ ClearLLab 10C Panely ClearLLab 10C jsou určeny pro diagnostiku in vitro pro kvalitativní identifikaci populací buněk pomocí víceparametrové imunofenotypizace na průtokových cytometrech Navios a Navios EX. Tyto reagencie se používají jako pomůcka při diferenciální diagnostice hematologicky abnormálních pacientů, kteří mají nebo je u nich podezření na následující hematopoetické neoplazie: chronická leukémie, akutní leukémie, non-Hodgkinův lymfom, myelom, myelodysplastický syndrom (MDS) a/nebo myeloproliferativní neoplazie (MPN). Reagencie lze použít s periferní plnou krví (odebranou do K 2 EDTA, kyseliny citrónové, citrátu a dextrózy (ACD) nebo heparinu), kostní dření (odebranou do K 2 EDTA, ACD nebo heparinu) a vzorky z lymfatických uzlin. Interpretace výsledků by měla být potvrzena patologem nebo odpovídajícím specialistou ve spojení s jinými klinickými a laboratorními nálezy.

Tyto reagencie poskytují víceparametrové kvalitativní výsledky pro níže uvedené povrchové antigeny:

PANELY ClearLLab 10C

Modrý laser

Červený laser

Fialový laser

Č. výrobku Zkumavka

APC- A750 PB KRO

FITC PE ECD PC5.5 PC7 APC APC- A700

B96805 Zkumavka B buněk

Kappa Lambda CD10 CD5 CD200 CD34 CD38 CD20 CD19 CD45

B96806 Zkumavka T buněk

CD4

CD2 CD56

CD5

CD34 CD7

CD8

CD3 CD45

TCR γδ

B96807 Zkumavka M1 buněk

CD16

CD7

CD10 CD13

CD64 CD34 CD14 HLA-DR CD11b CD45

B96808 Zkumavka M2 buněk

CD15 CD123 CD117 CD13

CD33 CD34 CD38 HLA-DR CD19 CD45

Na každé události záleží

4

Beckman Coulter • Panely ClearLLab 10C • C33359 AB

KOMPENZAČNÍ SOUPRAVA ClearLLab

Modrý laser

Červený laser

Fialový laser

Č. výrobku

APC- A750 PB KRO

FITC

PE

ECD PC5.5

PC7

APC APC- A700

B74074

CD4

CD4

CD3

CD4

CD4

CD4

CD4

CD4

CD4

CD8

Výše uvedená reagencie je dodávána ve standardizovaném formátu, který je určen k použití s reagenciemi na přípravu vzorků a nastavení cytometru a společně se softwarem pro sběr a analýzu dat. Panely ClearLLab 10C vyhovují doporučením pro standardizaci podle pokynů od společnosti Bethesda 2 . Dodatečné informace týkající se panelů ClearLLab 10C jsou dostupné na beckman.com/ClearLLab . VÝBĚR A INTERPRETACE PŘÍPADŮ

Data předložená v tomto přehledu případů byla vytvořena podle postupu, který je podrobně popsán v dokumentu ClearLLab 10C Panel Instructions For Use (Návod k použití panelů ClearLLab 10C) dostupném na beckman.com .

Reprezentativní případy byly vybrány z údajů klinické studie a posoudili je, okomentovali a interpretovali:

MUDr. Brent Wood, PhD Profesor, laboratorní medicína a patologie Vedoucí oddělení, hematopatologie Ředitel, Laboratoř hematologie a patologie SCCA Vedoucí lékař, laboratoře SCCA Washingtonská univerzita, Seattle, WA, USA

MUDr. Xueyan Chen, PhD Odborný asistent, laboratorní medicína Zástupce ředitele, laboratoř hematologie Washingtonská univerzita, Seattle, WA MUDr. Yi Zhou, PhD Odborný asistent Oddělení laboratorní medicíny Washingtonská univerzita, Seattle, WA

Protokoly analýzy: Stáhněte si protokol analýzy pro produkt ClearLLab 10C. Analýza: Stáhněte si soubory analýz systému Kaluza C specifické pro případ.

Na každé události záleží

5

Beckman Coulter • Panely ClearLLab 10C • C33359 AB

LITERATURA 1. Flow Cytometric Immunophenotyping for Hematologic Neoplasms. F.E. Craig, K.A. Foon. Blood. 2008; 111; 3941-3967. 2. Swerdlow SH, Campo E, Harris NL, Jaffe EA, Pileri SA, Stain H, Thiele J, & Vardiman JW (eds) (2008) WHO Classification of Tumors of Haematopoietic and Lymphoid Tissues. IARC Press: Lyon 3. The 2016 revision of the World Health Organization classification of lymphoid neoplasms. Swerdlow SH, et al. Blood. 2016;127:2375-90. 4. The 2016 revision of the World Health Organization classification of myeloid neoplasms and acute leukemia. Arber DA, et al. Blood 2016 127:2391-2405. 5. 2006 Bethesda International Consensus recommendations on the immunophenotypic analysis of hematolymphoid neoplasia by flow cytometry: optimal reagents and reporting for the flow cytometric diagnosis of hematopoietic neoplasia. Wood BL, Arroz M, Barnett D, DiGiuseppe J, Greig B, Kussick SJ, Oldaker T, Shenkin M, Stone E, Wallace P. Cytometry B Clin Cytom. 2007;72 Suppl 1:S14-22 6. 2006 Bethesda International Consensus recommendations on the flow cytometric immunophenotypic analysis of hematolymphoid neoplasia: medical indications. Davis BH, Holden JT, Bene MC, Borowitz MJ, Braylan RC, Cornfield D, Gorczyca W, Lee R, Maiese R, Orfao A, Wells D, Wood BL, Stetler-Stevenson M. Cytometry B Clin Cytom. 2007;72 Suppl 1:S5-13 7. 2006 Bethesda International Consensus Conference on Flow Cytometric Immunophenotyping of Hematolymphoid Neoplasia. Stetler-Stevenson M, Davis B, Wood B, Braylan R. Cytometry B Clin Cytom. 2007;72 Suppl 1:S3 8. Validation of cell-based fluorescence assays: practice guidelines from the ICSH and ICCS - part III - analytical issues. Tanqri S, Vall H, Kaplan D, Hoffman B, Purvis N, Porwit A, Hunsberger B, Shankey TV; ICSH/ICCS Working Group. Cytometry B Clin Cytom. 2013 Sep-Oct;84(5):291-308. doi: 10.1002/cyto.b.21106 9. Validation of cell-based fluorescence assays: practice guidelines from the ICSH and ICCS - part IV - postanalytic considerations. Barnett D, Louzao R, Gambell P, De J, Oldaker T, Hanson CA; ICSH/ICCS Working Group. Cytometry B Clin Cytom. 2013 Sep-Oct;84(5):309-14. doi: 10.1002/cyto.b.21107 10. Validation of cell-based fluorescence assays: practice guidelines from the ICSH and ICCS - part V - assay performance criteria. Wood B, Jevremovic D, Béné MC, Yan M, Jacobs P, Litwin V; ICSH/ICCS Working Group. Cytometry B Clin Cytom. 2013 Sep-Oct;84(5):315-23. doi: 10.1002/cyto.b.2110 • Navios Flow Cytometer Instructions For Use (Návod k použití průtokového cytometru Navios), PN 774513AG • Navios EX Flow Cytometer Instructions For Use (Návod k použití průtokového cytometru Navios EX), PN B77117AC • ClearLLab 10C Panels Instructions For Use (Návod k použití panelů ClearLLab 10C), PN C00197 • ClearLLab Compensation Beads Instructions For Use (Návod k použití kompenzačních perliček ClearLLab Compensation Beads), PN C00201 • ClearLLab Compensation Kit Instructions For Use (Návod k použití kompenzační soupravy ClearLLab), PN B74074 • ClearLLab Control Cells Instructions For use (Návod k použití kontrolních buněk ClearLLab Control Cells), PN B99884 • ClearLLab Control Cells QC Analysis Protocols Download Addendum (Dodatek věnovaný stahování protokolů analýzy QC pro kontrolní buňky ClearLLab Control Cells), PN C33267AA SOUVISEJÍCÍ DOKUMENTY • ClearLLab 10C Application System Guide (Systémová příručka aplikace ClearLLab 10C), PN C28525AA • Kaluza C Flow Cytometry Software Instructions for Use (Návod k použití softwaru pro průtokovou cytometrii Kaluza C), PN C20160

Na každé události záleží

6

Beckman Coulter • Panely ClearLLab 10C • C33359 AB

PŘÍPADY

V případech je použita následující priorita barev gatování:

Lymfocyty (vymezená oblast Ly) / NK buňky: červená CD19+ B-buňky: oranžová CD3+ T-buňky: modrozelená

Monocyty (vymezená oblast Mo): zelená Granulocyty (vymezená oblast Gr): modrá

CD45dim: fialová Další abnormální populace: tmavě modrozelená CD45 negativní populace: šedá

BEZ IMUNOFENOTYPICKÝCH ABNORMALIT Průtoková cytometrie je metoda charakterizace populací leukocytů. Může pomoci při diferenciální diagnostice hematologicky abnormálních pacientů, kteří trpí nebo je u nich podezření na hematopoetickou neoplazii, včetně chronické leukémie, akutní leukémie, non-Hodgkinova lymfomu, myelomu, myelodysplastického syndromu (MDS) a/nebo myeloproliferativních neoplazií (MPN). Pro identifikaci abnormálních populací v těchto klinických situacích je nezbytně nutná dobrá znalost normálních buněčných populací, které se nacházejí ve vzorcích plné krve, kostní dřeně a lymfatických uzlin. Následující příklady ukazují normální vzorky obarvené pomocí panelů ClearLLab 10C.

PLNÁ PERIFERNÍ KREV Případ č. 1: Normální plná krev

Stručný klinický přehled

U tohoto 65letého muže se projevuje trombocytopenie. Vzorek plné periferní krve je podroben imunofenotypizaci průtokovou cytometrií pomocí panelů ClearLLab 10C.

Imunofenotypizace průtokovou cytometrií

Zkumavka B buněk

Obrázek 1: Tento bodový graf Time (Čas) vs. CD45 je negatovaný a zobrazuje všechny postupně shromážděné události. Tento graf je určen k vyhodnocení kapalinových odchylek během sběru vzorků. Stabilní sběr dat je vyjádřen rovnoměrným vzorem událostí v průběhu času. Události, které se odchylují od stabilního vzoru, mohou být vyloučeny ve vymezené oblasti Time (Čas).

Obrázek 2: Bodový graf FS INT vs. FS PEAK zobrazuje události ve vymezené oblasti Time (Čas). Tento graf je určen k vyloučení dubletů nebo agregátů buněk. Singletové události vykazují lineární vztahmezi INT a PEAK a jsou zahrnuty ve vymezené oblasti Singlets (Singlety), zatímco dublety se nacházejí mimo lineární vztah.

Obsah > Bez imunofenotypické abnormality > Případ č. 1: Normální plná krev

Na každé události záleží

7

Beckman Coulter • Panely ClearLLab 10C • C33359 AB

Zkumavka B buněk

Obrázek 3: Tento bodový graf kolmého rozptylu proti přímému rozptylu zobrazuje události ve vymezené oblasti Singlets (Singlety). Tento graf je určen k vyloučení buněčného odpadu, který obvykle má snížený přímý rozptyl. Časné apoptotické buňky také můžou mít mírně zvýšený kolmý rozptyl, zatímco pozdní apoptotické a nekrotické buňky mají proměnlivě snížený kolmý rozptyl. Životaschopné buňky jsou zahrnuty ve vymezené oblasti Cells (Buňky).

Obrázek 4: Tento bodový graf CD45 proti kolmému rozptylu zobrazuje události ve vymezené oblasti Cells (Buňky). Účelem tohoto grafu je zvýraznit různé podskupiny bílých krvinek, které jsou gatovány jako CD45 pozitivní. CD45 negativní populace obvykle zahrnuje červené krvinky, agregáty krevních destiček, tkáňový odpad nebo nehematopoetické buňky.

Obrázek 6: Tento bodový graf CD19 proti kolmému rozptylu zobrazuje události ve vymezené oblasti Cells (Buňky). Vymezená oblast CD19+ určuje CD19 pozitivní buňky. CD19 je exprimován na zralých a nezralých B-buňkách, stejně jako na většině plazmatických buněk. Tyto buňky obvykle mají nízký až mírný kolmý rozptyl.

Obrázek 5: Tento bodový graf CD45 proti kolmému rozptylu zobrazuje události ve vymezené oblasti CD45+. Tento bodový graf umožňuje rozlišení mezi několika populacemi bílých krvinek, které se typicky nacházejí ve vzorcích periferní krve, kostní dřeně a lymfatických uzlin, mezi které patří lymfocyty (vymezená oblast Ly, červená/ oranžová), monocyty (vymezená oblast Mo, zelená) a granulocyty (vymezená oblast Gr, modrá). Vymezená oblast CD45dim (fialová) pokrývá plochu, na které se obvykle nacházejí časné progenitory, tj. myeloblasty a nezralé B-buňky. V této oblasti se rovněž můžou vyskytovat bazofily, plazmacytoidní dendritické buňky, plazmatické buňky a NK buňky. Aplikací různých barev na události obsažené v každé vymezené oblasti mohou být různé populace identifikovány po celou dobu analýzy.

Obsah > Bez imunofenotypické abnormality > Případ č. 1: Normální plná krev

Na každé události záleží

8

Beckman Coulter • Panely ClearLLab 10C • C33359 AB

Zkumavka B buněk

Obrázek 7: Tento bodový graf kappa proti kolmému rozptylu zobrazuje všechny životaschopné buňky. Povrchový lehký řetězec kappa je exprimován na zralých B-buňkách (oranžová) a na pozdnímstádiu nezralýchB-buněk. Podíl kappa pozitivních B-buněk je normálně vyšší než kappa negativních (lambda pozitivních) B-buněk. Zdánlivá pozitivita na kappa je pozorována na monocytech (zelená) kvůli vazbě imunoglobulinu zprostředkované Fc receptorem. Buňky pozitivní na lehký řetězec kappa jsou zobrazeny na pravé straně grafu.

Obrázek 8: Tento bodový graf lambda proti kolmému rozptylu zobrazuje všechny životaschopné buňky. Povrchový lehký řetězec lambda je exprimován na zralých B-buňkách(oranžová)anapozdnímstádiunezralýchB-buněk.Podíl lambdapozitivních B-buněk je normálně nižší než lambda negativních (kappa pozitivních) B-buněk. Zdánlivá pozitivita na lambdu je pozorována na monocytech (zelená) kvůli vazbě imunoglobulinu zprostředkované Fc receptorem. Buňky pozitivní na lehký řetězec lambda jsou zobrazeny na pravé straně grafu.

Obrázek 9: Tento bodový graf CD10 proti kolmému rozptylu zobrazuje všechny životaschopné buňky. CD10 je exprimován na nezralýchB-buňkách, zralýchB-buňkách zárodečného centra a zralých granulocytech (modrá). Granulocytymají vysoký kolmý rozptyl, na rozdíl od lymfoidních buněk, které mají nízký kolmý rozptyl.

Obrázek 10: Tento bodový graf CD5 proti kolmému rozptylu zobrazuje všechny životaschopné buňky. CD5 je exprimován na nezralých a zralých T-buňkách (červená, vpravo dole) a slabě v podskupině zralých B-buněk (oranžová). Tyto lymfoidní buňky obvykle mají nízký kolmý rozptyl.

Obsah > Bez imunofenotypické abnormality > Případ č. 1: Normální plná krev

Na každé události záleží

9

Beckman Coulter • Panely ClearLLab 10C • C33359 AB

Zkumavka B buněk

Obrázek 11: Tento bodový graf CD200 proti kolmému rozptylu zobrazuje všechny životaschopné buňky. CD200 je typicky exprimován na B-buňkách, ale je negativní v některých neoplastickýchB-buňkách. To je obzvláště užitečné při odlišování lymfomu z plášťových buněk (obvykle CD200 negativní) od chronické lymfocytární leukémie / lymfomu z malých lymfocytů (obvykle CD200 pozitivní).

Obrázek 12: Tento bodový graf CD34 proti kolmému rozptylu zobrazuje všechny životaschopné buňky. CD34 je marker časných hematopoetických progenitorů. Je exprimován na hematopoetických kmenových buňkách, časných myeloidních progenitorech (myeloblastech) a nezralých B- a T-buňkách (lymfoblastech). Zralé granulocyty,monocyty a lymfocyty jsou negativnínaCD34.CD34pozitivní progenitory normálně v periferní krvi představují méně než 0,01 % bílých krvinek.

Obrázek 14: Tento bodový graf CD20 proti kolmému rozptylu zobrazuje všechny životaschopné buňky. CD20 je exprimován na zralých B-buňkách (oranžová) a proměnlivá nízká hladina exprese je na podskupině zralých T-buněk. Proměnlivá exprese je na pozdějšímstádiu nezralých B-buněk. CD20 pozitivní buňky jsou obvykle ve vymezené oblasti lymfocytů s nízkým kolmým rozptylem.

Obrázek 13: Tento bodový graf CD38 proti kolmému rozptylu zobrazuje všechny životaschopné buňky. CD38 je aktivační marker. Nejvyšší úroveň exprese je na plazmatických buňkách, mírná úroveň exprese na nezralýchmyeloidních a lymfoidních progenitorech, nízká úroveň exprese je namonocytech (zelená) a proměnlivá úroveň exprese je na aktivovaných zralých lymfocytech.

Obsah > Bez imunofenotypické abnormality > Případ č. 1: Normální plná krev

Na každé události záleží

10

Beckman Coulter • Panely ClearLLab 10C • C33359 AB

Zkumavka B buněk

Obrázek15.Tentobodovýgraf lambdavs.kappazobrazujevšechnyCD19+buňky.Časné nezralé B-buňky (fialová) neexprimují povrchové lehké řetězce imunoglobulinů, tj. jsou negativnína lehkýřetězeckappa i lambda.ZraléB-buňky jsoupolyklonální,exprimujíbuď lehký řetězec kappa, nebo lambda. Normální poměr kappa ku lambdě je 1,4, rozsah je mezi 1 a 2. Zvýšené pozadí kvůli adherentnímplazmatickým imunoglobulinům je běžné.

Obrázek 16. Tento bodový graf CD19 vs. CD20 zobrazuje všechny buňky ve vymezené oblasti lymfocytů (Ly). Zralé B-buňky exprimují CD19 i CD20 (oranžová). Některé neoplastické B-buňky mohou vykazovat sníženou expresi CD19 nebo CD20.

Obrázek 18. Tento bodový graf CD38 vs. CD10 zobrazuje všechny buňky ve vymezené oblasti lymfocytů (Ly). Nejvyšší hladina exprese CD38 je na plazmatických buňkách, mírná hladina exprese na nezralýchB-buňkách a nízká hladina exprese je naB-buňkách zárodečného centra. Většina zralých B-buněk (oranžová) vykazuje nízkou až nulovou expresi CD38. T-buňky (červená) vykazují proměnlivou expresi CD38 v závislosti na stádiu aktivace.

Obrázek 17. Tento bodový graf CD19 vs. CD10 zobrazuje všechny buňky ve vymezené oblasti lymfocytů (Ly). B-buňky jsou CD19 pozitivní (oranžová). CD10 pozitivní zralé B-buňky jsou rozprostřeny v zárodečných centrech v lymfatických uzlinách a malá podskupina pozdního stádia nezralých B-buněk je přítomna v nasátých vzorcích periferní krve a kostní dřeně.

Obsah > Bez imunofenotypické abnormality > Případ č. 1: Normální plná krev

Na každé události záleží

11

Beckman Coulter • Panely ClearLLab 10C • C33359 AB

Zkumavka B buněk

Obrázek 19. Tento bodový graf CD20 vs. CD10 zobrazuje všechny buňky ve vymezené oblasti lymfocytů (Ly). Většina zralých B-buněk jednotně exprimuje vysokámnožství CD20 bez CD10.

Obrázek 20. Tento bodový graf CD19 vs. CD5 zobrazuje všechny buňky ve vymezené oblasti lymfocytů (Ly). CD5 je exprimován na T-buňkách (červená, nahoře vlevo), proměnlivá nízká hladina exprese je na podskupině normálních zralých B-buněk (oranžová) a je exprimován na některých podtypech neoplastických B-buněk.

Obrázek 22. Tento bodový graf CD5 vs. CD200 zobrazuje všechny buňky ve vymezené oblasti lymfocytů (Ly). Většina zralých B-buněk normálně exprimuje CD200 a u podskupiny je proměnlivá exprese CD5. Neoplastické B-buňky v chronické lymfocytární leukémii / lymfomu zmalých lymfocytů typicky exprimují CD5 a CD200, zatímco lymfom z plášťových buněk typicky exprimuje CD5, ale nikoliv CD200.

Obrázek 21. Tento bodový graf CD20 vs. CD200 zobrazuje všechny buňky ve vymezené oblasti lymfocytů (Ly). Většina zralých B-buněk (oranžová) má nízkou až mírnou hladinu exprese CD200.

Obsah > Bez imunofenotypické abnormality > Případ č. 1: Normální plná krev

Na každé události záleží

12

Beckman Coulter • Panely ClearLLab 10C • C33359 AB

Zkumavka T buněk

Obrázek 1: Tento bodový graf Time (Čas) vs. CD45 je negatovaný a zobrazuje všechny postupně shromážděné události. Tento graf je určen k vyhodnocení kapalinových odchylek během sběru vzorků. Stabilní sběr dat je vyjádřen rovnoměrným vzorem událostí v průběhu času. Události, které se odchylují od stabilního vzoru, mohou být vyloučeny ve vymezené oblasti Time (Čas).

Obrázek 2: Bodový graf FS INT vs. FS PEAK zobrazuje události ve vymezené oblasti Time (Čas). Tento graf je určen k vyloučení dubletů nebo agregátů buněk. Singletové události vykazují lineární vztahmezi INT a PEAK a jsou zahrnuty ve vymezené oblasti Singlets (Singlety), zatímco dublety se nacházejí mimo lineární vztah.

Obrázek 3: Tento bodový graf kolmého rozptylu proti přímému rozptylu zobrazuje události ve vymezené oblasti Singlets (Singlety). Tento graf je určen k vyloučení buněčného odpadu, který obvyklemá snížený přímý rozptyl a zvýšený kolmý rozptyl. Časnéapoptotickébuňkytakémůžoumítmírnězvýšenýkolmýrozptyl,zatímcopozdní apoptotické a nekrotické buňkymají proměnlivě snížený kolmý rozptyl. Životaschopné buňky jsou zahrnuty ve vymezené oblasti Cells (Buňky).

Obrázek 4: Tento bodový graf CD45 proti kolmému rozptylu zobrazuje události ve vymezené oblasti Cells (Buňky). Účelem tohoto grafu je zvýraznit různé typy bílých krvinek, které jsou CD45 pozitivní. CD45 negativní populace obvykle zahrnuje červené krvinky, agregáty krevních destiček nebo nehematopoetické buňky.

Obsah > Bez imunofenotypické abnormality > Případ č. 1: Normální plná krev

Na každé události záleží

13

Beckman Coulter • Panely ClearLLab 10C • C33359 AB

Zkumavka T buněk

Obrázek 5: Tento bodový graf CD45 proti kolmému rozptylu zobrazuje události ve vymezené oblasti CD45+. Tento bodový graf umožňuje rozlišení mezi několika populacemi bílých krvinek, které se typicky nacházejí ve vzorcích periferní krve, kostní dřeně a lymfatických uzlin, mezi které patří lymfocyty (vymezená oblast Ly, červená/ modrozelená), monocyty (vymezená oblast Mo, zelená) a granulocyty (vymezená oblast Gr, modrá). Vymezená oblast CD45dim (fialová) pokrývá plochu, na které se obvykle nacházejí myeloblasty a nezralé B-buňky. Do této oblasti rovněž mohou spadat bazofily, plazmacytoidní dendritické buňky, plazmatické buňky a NK buňky. Aplikací různých barev na události obsažené v každé vymezené oblasti mohou být různé populace sledovány po celou dobu analýzy.

Obrázek 6: Tento bodový graf CD3 proti kolmému rozptylu zobrazuje všechny životaschopné buňky. Vymezená oblast CD3+ určuje buňky s povrchovou expresí CD3 (modrozelená). CD3 je vysoce specifický pro T-buňky a je exprimován pouze na povrchu zralých T-buněk a na pozdním stádiu nezralých T-buněk. Tyto buňky obvykle mají nízký až mírný kolmý rozptyl.

Obrázek 8: Tento bodový graf CD4 proti kolmému rozptylu zobrazuje všechny životaschopné buňky. Vysoká hladina exprese CD4 je na podskupině nezralých a zralých T-buněk (modrozelená). CD4 je také exprimován namonocytárních buňkách (zelená) v nižší míře než na CD4 pozitivních T-buňkách.

Obrázek 7: Tento bodový graf TCR γδ proti kolmému rozptylu zobrazuje všechny životaschopné buňky. TCR γδ je podjednotka T-buněčného receptoru a je exprimována na malé podskupině cytotoxických T-buněk. Tyto buňky obvykle mají nízký kolmý rozptyl (modrozelená).

Obsah > Bez imunofenotypické abnormality > Případ č. 1: Normální plná krev

Na každé události záleží

14

Beckman Coulter • Panely ClearLLab 10C • C33359 AB

Zkumavka T buněk

Obrázek 9: Tento bodový graf CD2 proti kolmému rozptylu zobrazuje všechny životaschopné buňky. CD2 je antigen, který je exprimován téměř všemi nezralými a zralými T-buňkami (modrozelená). CD2 je rovněž exprimován na NK buňkách (červená, vpravo dole) a v nižší míře na monocytech (zelená).

Obrázek 10: Tento bodový graf CD56 proti kolmému rozptylu zobrazuje všechny životaschopné buňky. CD56 je obvykle exprimován na hlavní podskupině NK buněk (červená), na T-buňkách s aktivitou NK buněk (NK/T-buňky) a mnohých gama/delta T-buňkách (modrozelená). CD56 je rovněž částečně exprimován na monocytárních buňkách (zelená), jak za reaktivních, tak neoplastických podmínek.

Obrázek 11: Tento bodový graf CD5 proti kolmému rozptylu zobrazuje všechny životaschopné buňky. CD5 je exprimován na většině nezralých a zralých T-buněk (modrozelená) a nízká hladina exprese je na podskupině zralých B-buněk. Velmi časná stádia nezralých T-buněk a gama/delta T-buněk typickymají nízkou až nulovou expresi CD5. Malá podskupina NK buněk exprimuje CD5.

Obrázek 12: Tento bodový graf CD34 proti kolmému rozptylu zobrazuje všechny životaschopné buňky. CD34 je marker časných hematopoetických progenitorů. Je exprimován na hematopoetických kmenových buňkách, časných myeloidních progenitorech (myeloblastech) a nezralých B- a T-buňkách (lymfoblastech). Zralé granulocyty,monocyty a lymfocyty jsou negativnínaCD34.CD34pozitivní progenitory normálně v periferní krvi představují méně než 0,01 % bílých krvinek.

Obsah > Bez imunofenotypické abnormality > Případ č. 1: Normální plná krev

Na každé události záleží

15

Beckman Coulter • Panely ClearLLab 10C • C33359 AB

Zkumavka T buněk

Obrázek 13: Tento bodový graf CD7 proti kolmému rozptylu zobrazuje všechny životaschopné buňky. CD7 je exprimován na nezralých T-buňkách v nejčasnějším stádiu vývoje T-buněk a přetrvává během celého zrání T-buněk, aby byl proměnlivě exprimovánnazralýchT-buňkách(modrozelená).Jerovněž jednotněexprimovánnaNK buňkách (červená, vpravo dole) a slabě exprimován na podskupině plazmacytoidních dendritických buněk a podskupině liniově zadaných CD34 pozitivních progenitorů.

Obrázek 14: Tento bodový graf CD8 proti kolmému rozptylu zobrazuje všechny životaschopné buňky. CD8 je exprimován na podskupině nezralých a zralých T-buněk (modrozelená) a definuje cytotoxickou populaci zralých T-buněk. NK buňky a gama- delta T-buňky ho exprimují v proměnlivé nízké hladině.

Obrázek 15. Tento bodový graf CD3 vs. CD56 zobrazuje všechny buňky ve vymezené oblasti lymfocytů (Ly). T-buňky jsou definovány expresí CD3, protože je přítomen na všech zralých T-buňkách a není exprimován buňkami ostatních linií. NK buňky ze své podstaty neexprimují povrchový CD3, ale exprimují CD56 na hlavní podskupině (červená, vlevo nahoře). Malé podskupiny zralých T-buněk rovněž exprimují CD56, konkrétně T-buňky s aktivitou NK buněk (NK/T-buňky) a gama-delta T-buňky.

Obrázek 16. Tento bodový graf CD5 vs. CD3 zobrazuje všechny buňky ve vymezené oblasti lymfocytů (Ly). Koexprese CD3 a CD5 probíhá na většině zralých T-buněk (modrozelená), avšak malá podskupina cytotoxických T-buněk s morfologií velkých granulárních lymfocytů často vykazuje sníženou až nulovou expresi CD5. CD5 není exprimován na většině NK buněk.

Obsah > Bez imunofenotypické abnormality > Případ č. 1: Normální plná krev

Na každé události záleží

16

Beckman Coulter • Panely ClearLLab 10C • C33359 AB

Zkumavka T buněk

Obrázek 18. Tento bodový graf CD8 vs. CD4 zobrazuje všechny buňky ve vymezené oblasti lymfocytů (Ly). CD3 pozitivní T-buňky (modrozelená) zahrnují CD4 pozitivní (pomocné) a CD8 pozitivní (cytotoxické) podskupiny. V periferní krvi obvykle CD4 pozitivní T-buňky převyšují počtem CD8 pozitivní T-buňky v poměru CD4:CD8 1:1 až 4:1. Rovněž jsou přítomny občasné CD4 a CD8 dvojitě negativní nebo dvojitě pozitivní T-buňky. Dvojitě negativní T-buňky obvykle z většiny sestávají z gama/ delta T-buněk. Je třeba poznamenat, že CD4 pozitivní, ale CD3 negativní buňky (červené, vlevo uprostřed) jsou monocyty zahrnuté ve vymezené oblasti lymfocytů. To názorně ukazuje, že gatování CD45 proti kolmému rozptylu neumožňuje čistou identifikaci lymfocytů.

Obrázek 17. Tento bodový graf CD7 vs. CD2 zobrazuje všechny buňky ve vymezené oblasti lymfocytů (Ly). Koexprese CD2 a CD7 probíhá na převážné většině zralých T-buněk (modrozelená) a NK buněk (červená, vpravo nahoře).

Obrázek 19. Tento bodový graf CD3 vs. CD4 zobrazuje všechny buňky ve vymezené oblasti lymfocytů (Ly). Všechny CD4 pozitivní T-buňky exprimují CD3. Monocyty a plazmacytoidní dendritické buňky exprimují nižší hladiny CD4 než CD4 pozitivní T-buňky a neexprimují CD3. NK buňky neexprimují CD3 ani CD4.

Obrázek 20. Tento bodový graf CD3 vs. CD8 zobrazuje všechny buňky ve vymezené oblasti lymfocytů (Ly). Všechny CD8 pozitivní T-buňky exprimují CD3 (modrozelená). Malá podskupina NK buněk rovněž exprimuje CD8 (červená, vlevo nahoře) bez CD3.

Obsah > Bez imunofenotypické abnormality > Případ č. 1: Normální plná krev

Na každé události záleží

17

Beckman Coulter • Panely ClearLLab 10C • C33359 AB

Zkumavka T buněk

Obrázek 21. Tento bodový graf CD3 vs. TCR γδ zobrazuje všechny buňky ve vymezené oblasti lymfocytů (Ly). Malá podskupina T-buněk exprimuje TCR gama/delta, který je koexprimován s CD3. Vysoce lineární vztah mezi CD3 a TCR je způsoben jejich přítomností v heterodimernímkomplexu, kterýmá neměnný poměr 1:1, takže zvýšená exprese jednoho se projeví jako zvýšená exprese druhého.

Obsah > Bez imunofenotypické abnormality > Případ č. 1: Normální plná krev

Na každé události záleží

18

Beckman Coulter • Panely ClearLLab 10C • C33359 AB

Zkumavka M1 buněk

Obrázek 1: Tento bodový graf Time (Čas) vs. CD45 je negatovaný a zobrazuje všechny postupně shromážděné události. Tento graf je určen k vyhodnocení kapalinových odchylek během sběru vzorků. Stabilní sběr dat je vyjádřen rovnoměrným vzorem událostí v průběhu času. Události, které se odchylují od stabilního vzoru, mohou být vyloučeny ve vymezené oblasti Time (Čas).

Obrázek 2: Bodový graf FS INT vs. FS PEAK zobrazuje události ve vymezené oblasti Time (Čas). Tento graf je určen k vyloučení dubletů nebo agregátů buněk. Singletové události vykazují lineární vztahmezi INT a PEAK a jsou zahrnuty ve vymezené oblasti Singlets (Singlety), zatímco dublety se nacházejí mimo lineární vztah.

Obrázek 4: Tento bodový graf CD45 proti kolmému rozptylu zobrazuje události ve vymezené oblasti Cells (Buňky). Účelem tohoto grafu je zvýraznit různé podskupiny bílých krvinek, které jsou gatovány jako CD45 pozitivní. CD45 negativní populace obvykle zahrnuje červené krvinky, agregáty krevních destiček, tkáňový odpad nebo nehematopoetické buňky.

Obrázek 3: Tento bodový graf kolmého rozptylu proti přímému rozptylu zobrazuje události ve vymezené oblasti Singlets (Singlety). Tento graf je určen k vyloučení buněčného odpadu, který obvyklemá snížený přímý rozptyl a zvýšený kolmý rozptyl. Časnéapoptotickébuňkytakémůžoumítmírnězvýšenýkolmýrozptyl,zatímcopozdní apoptotické a nekrotické buňkymají proměnlivě snížený kolmý rozptyl. Životaschopné buňky jsou zahrnuty ve vymezené oblasti Cells (Buňky).

Obsah > Bez imunofenotypické abnormality > Případ č. 1: Normální plná krev

Na každé události záleží

19

Beckman Coulter • Panely ClearLLab 10C • C33359 AB

Zkumavka M1 buněk

Obrázek 5: Tento bodový graf CD45 proti kolmému rozptylu zobrazuje události ve vymezené oblasti CD45+. Tento bodový graf umožňuje rozlišení mezi několika populacemi bílých krvinek, které se typicky nacházejí ve vzorcích periferní krve, kostní dřeně a lymfatických uzlin, mezi které patří lymfocyty (vymezená oblast Ly, červená), monocyty (vymezená oblast Mo, zelená) a granulocyty (vymezená oblast Gr, modrá). Vymezená oblast CD45dim (fialová) pokrývá plochu, na které se obvykle nacházejímyeloblastyanezraléB-buňky.Dotétooblastirovněžmohouspadatbazofily, plazmacytoidní dendritické buňky, plazmatické buňky a NK buňky. Aplikací různých barev na události obsažené v každé vymezené oblasti mohou být různé populace sledovány po celou dobu analýzy.

Obrázek 6: Tento bodový graf CD16 proti kolmému rozptylu zobrazuje všechny životaschopné buňky. Nejvyšší hladina exprese CD16 je na zralých granulocytech (modrá). Většina NK buněk exprimuje CD16 (červená, vpravo dole), stejně jako podskupina aktivovaných monocytů (zelená).

Obrázek 8: Tento bodový graf CD10 proti kolmému rozptylu zobrazuje všechny životaschopné buňky. CD10 je exprimován na nezralýchB-buňkách, zralýchB-buňkách zárodečného centra a zralých granulocytech (modrá). Granulocytymají vysoký kolmý rozptyl, na rozdíl od lymfoidních buněk, které mají nízký kolmý rozptyl.

Obrázek 7: Tento bodový graf CD7 proti kolmému rozptylu zobrazuje všechny životaschopné buňky. CD7 je exprimován na nezralých T-buňkách v nejčasnějším stádiu vývoje T-buněk a přetrvává během celého zrání T-buněk, aby byl proměnlivě exprimován na zralých T-buňkách (červená, vpravo dole). Je rovněž exprimován na NK buňkách a slabě exprimován na podskupině plazmacytoidních dendritických buněk a podskupině liniově zadaných progenitorů.

Obsah > Bez imunofenotypické abnormality > Případ č. 1: Normální plná krev

Na každé události záleží

20

Beckman Coulter • Panely ClearLLab 10C • C33359 AB

Zkumavka M1 buněk

Obrázek 9: Tento bodový graf CD13 proti kolmému rozptylu zobrazuje všechny životaschopné buňky. CD13 je exprimován na dozrávajících granulocytech (modrá), zralých monocytech (zelená) a myeloidních progenitorech (fialová).

Obrázek 10: Tento bodový graf CD64 proti kolmému rozptylu zobrazuje všechny životaschopné buňky. Nejvyšší hladina exprese CD64 je na zralých monocytech (zelená). Exprese CD64 v klidových zralých granulocytech (modrá) není výrazná, ale zvyšuje se s aktivací granulocytů. CD64 není exprimován na lymfocytech (červená) ani na většině CD34 pozitivních progenitorů. Aktivované zralé monocyty exprimují nižší hladiny CD64 a mají nižší kolmý rozptyl.

Obrázek 12: Tento bodový graf CD14 proti kolmému rozptylu zobrazuje všechny životaschopné buňky. Vysoká hladina exprese CD14 je na zralých monocytech (zelená) a nízká hladina exprese je na zralých granulocytech (modrá). Aktivované zralé monocyty exprimují nižší hladiny CD14 a mají nižší kolmý rozptyl.

Obrázek 11: Tento bodový graf CD34 proti kolmému rozptylu zobrazuje všechny životaschopné buňky. CD34 je marker časných hematopoetických progenitorů. Je exprimován na hematopoetických kmenových buňkách, časných myeloidních progenitorech (myeloblastech) a nezralých B- a T-buňkách (lymfoblastech). Zralé granulocyty,monocytya lymfocyty jsounegativnínaCD34.CD34pozitivníprogenitory normálně v periferní krvi představují méně než 0,01 % bílých krvinek.

Obsah > Bez imunofenotypické abnormality > Případ č. 1: Normální plná krev

Na každé události záleží

21

Beckman Coulter • Panely ClearLLab 10C • C33359 AB

Zkumavka M1 buněk

Obrázek 13: Tento bodový graf HLA-DR proti kolmému rozptylu zobrazuje všechny životaschopné buňky. HLA-DR je exprimován na antigen prezentujících buňkách, včetně monocytů (zelená) a plazmacytoidních dendritických buněk. Rovněž je exprimován na CD34 pozitivních progenitorech, nezralých a zralých B-buňkách a aktivovaných T-buňkách.

Obrázek 14: Tento bodový graf CD11b proti kolmému rozptylu zobrazuje všechny životaschopnébuňky.CD11b jeexprimovánnagranulocytech(modrá)anamonocytech (zelená). CD11b je rovněž exprimován na NK buňkách a bazofilech.

Obrázek 16. Tento bodový graf CD16 vs. CD13 zobrazuje všechny životaschopné buňky. CD13 je exprimován na granulocytech (modrá), monocytech (zelená), bazofilech a CD34 pozitivních progenitorech. CD16 je exprimován na dozrávajících granulocytech (modrá) a podskupině NK buněk (červená, vpravo dole).

Obrázek 15. Tentobodovýgraf CD11bvs. CD16 zobrazuje všechny životaschopnébuňky. CD11b je exprimován na monocytech (zelená), nezralých a zralých granulocytech (modrá) a NK buňkách (červená). CD16 je exprimován na nezralých a zralých granulocytech (modrá) a podskupiněNKbuněk (červená, vpravo nahoře). Aktivované zralé monocyty exprimují proměnlivé hladiny CD16 a jsou CD11b pozitivní.

Obsah > Bez imunofenotypické abnormality > Případ č. 1: Normální plná krev

Na každé události záleží

22

Beckman Coulter • Panely ClearLLab 10C • C33359 AB

Zkumavka M1 buněk

Obrázek 17. Tentobodový graf CD13 vs. CD34 zobrazuje všechny životaschopné buňky. CD13 je exprimován na granulocytech (modrá), monocytech (zelená), bazofilech aCD34pozitivních progenitorech. CD34 je exprimován na časných hematopoetických progenitorech. Zralé granulocyty, monocyty a lymfocyty jsou negativní na CD34.

Obrázek 18. Tentobodovýgraf CD14 vs. CD64 zobrazuje všechny životaschopné buňky. Vysoká hladina exprese CD64 je namonocytech (zelená) a nižší hladina exprese je na granulocytech (modrá). Vysoká hladina exprese CD14 je namonocytech a nižší hladina exprese je na granulocytech (modrá). Aktivované zralé monocyty mají proměnlivě nižší hladinu exprese CD14 a CD64.

Obrázek 20. Tento bodový graf HLA-DR vs. CD10 zobrazuje všechny životaschopné buňky. HLA-DR je exprimován namonocytech (zelená), B-buňkách, plazmacytoidních dendritických buňkách a CD34 pozitivních progenitorech. CD10 je exprimován zralými granulocyty (modrá).

Obrázek 19. Tento bodový graf CD14 vs. CD16 zobrazuje všechny životaschopné buňky. Vysoká hladina exprese CD14 je namonocytech (zelená) a nižší hladina exprese je na granulocytech (modrá, vlevo nahoře). CD16 je exprimován na granulocytech a podskupině NK buněk (červená, vlevo uprostřed). Aktivované zralé monocytymají proměnlivě nižší hladinu exprese CD14 a CD16.

Obsah > Bez imunofenotypické abnormality > Případ č. 1: Normální plná krev

Na každé události záleží

23

Beckman Coulter • Panely ClearLLab 10C • C33359 AB

Zkumavka M1 buněk

Obrázek 21. Tento bodový graf CD7 vs. CD13 zobrazuje všechny životaschopné buňky. CD7 je exprimován na T-buňkách a NK buňkách (červená, vpravo dole). CD13 je exprimován na granulocytech (modrá), monocytech (zelená), bazofilech a CD34 pozitivních progenitorech. Koexprese CD13 a CD7 není obecně k vidění.

Obsah > Bez imunofenotypické abnormality > Případ č. 1: Normální plná krev

Na každé události záleží

24

Beckman Coulter • Panely ClearLLab 10C • C33359 AB

Zkumavka M2 buněk

Obrázek 1: Tento bodový graf Time (Čas) vs. CD45 je negatovaný a zobrazuje všechny postupně shromážděné události. Tento graf je určen k vyhodnocení kapalinových odchylek během sběru vzorků. Stabilní sběr dat je vyjádřen rovnoměrným vzorem událostí v průběhu času. Události, které se odchylují od stabilního vzoru, mohou být vyloučeny ve vymezené oblasti Time (Čas).

Obrázek 2: Bodový graf FS INT vs. FS PEAK zobrazuje události ve vymezené oblasti Time (Čas). Tento graf je určen k vyloučení dubletů nebo agregátů buněk. Singletové události vykazují lineární vztahmezi INT a PEAK a jsou zahrnuty ve vymezené oblasti Singlets (Singlety), zatímco dublety se nacházejí mimo lineární vztah.

Obrázek 4: Tento bodový graf CD45 proti kolmému rozptylu zobrazuje události ve vymezené oblasti Cells (Buňky). Účelem tohoto grafu je zvýraznit různé podskupiny bílých krvinek, které jsou gatovány jako CD45 pozitivní. CD45 negativní populace obvykle zahrnuje červené krvinky, agregáty krevních destiček, tkáňový odpad nebo nehematopoetické buňky.

Obrázek 3: Tento bodový graf kolmého rozptylu proti přímému rozptylu zobrazuje události ve vymezené oblasti Singlets (Singlety). Tento graf je určen k vyloučení buněčného odpadu, který obvykle má snížený přímý rozptyl. Časné apoptotické buňky také můžou mít mírně zvýšený kolmý rozptyl, zatímco pozdní apoptotické a nekrotické buňky mají proměnlivě snížený kolmý rozptyl. Životaschopné buňky jsou zahrnuty ve vymezené oblasti Cells (Buňky).

Obsah > Bez imunofenotypické abnormality > Případ č. 1: Normální plná krev

Na každé události záleží

25

Beckman Coulter • Panely ClearLLab 10C • C33359 AB

Zkumavka M2 buněk

Obrázek 5: Tento bodový graf CD45 proti kolmému rozptylu zobrazuje události ve vymezené oblasti CD45+. Tento bodový graf umožňuje rozlišení mezi několika populacemi bílých krvinek, které se typicky nacházejí ve vzorcích periferní krve, kostní dřeně a lymfatických uzlin, mezi které patří lymfocyty (vymezená oblast Ly, červená), monocyty (vymezená oblast Mo, zelená) a granulocyty (vymezená oblast Gr, modrá). Vymezená oblast CD45dim (fialová) pokrývá plochu, na které se obvykle nacházejímyeloblastyanezraléB-buňky.Dotétooblastirovněžmohouspadatbazofily, plazmacytoidní dendritické buňky, plazmatické buňky a NK buňky. Aplikací různých barev na události obsažené v každé vymezené oblasti mohou být různé populace sledovány po celou dobu analýzy.

Obrázek 6: Tento bodový graf CD15 proti kolmému rozptylu zobrazuje všechny životaschopné buňky. CD15 je exprimován na granulocytech (modrá) a nižší hladina exprese je na monocytech (zelená).

Obrázek 8: Tento bodový graf CD117 proti kolmému rozptylu zobrazuje všechny životaschopnébuňky.CD117 jeproměnlivěexprimovánnaCD34pozitivníchmyeloidních progenitorech, časných promyelocytech a časných erytroidních prekurzorech a ve vysokémíře jeexprimovánnamastocytech.CD117 jerovněžexprimovánnapodskupinách reaktivních NK buněk a neoplastických plazmatických buněk. Zralé granulocyty, monocyty a lymfocyty jsou negativní na CD117.

Obrázek 7: Tento bodový graf CD123 proti kolmému rozptylu zobrazuje všechny životaschopnébuňky.VysokáhladinaexpreseCD123 jenabazofilechaplazmacytoidních dendritických buňkách a nižší hladina exprese je na CD34 pozitivních myeloidních progenitorech a monocytech (zelená).

Obsah > Bez imunofenotypické abnormality > Případ č. 1: Normální plná krev

Na každé události záleží

26

Beckman Coulter • Panely ClearLLab 10C • C33359 AB

Zkumavka M2 buněk

Obrázek 9: Tento bodový graf CD13 proti kolmému rozptylu zobrazuje všechny životaschopné buňky. CD13 je exprimován na granulocytech (modrá) a zralých monocytech (zelená) a je proměnlivě exprimován na myeloidních progenitorech.

Obrázek 10: Tento bodový graf CD33 proti kolmému rozptylu zobrazuje všechny životaschopné buňky. Vysoká hladina exprese CD33 je na monocytech (zelená) a nižší hladina exprese je na granulocytech (modrá). CD33 je rovněž exprimován na bazofilech, podskupině NK buněk (červená) a podskupině CD34 pozitivních myeloidních progenitorů.

Obrázek 12: Tento bodový graf CD38 proti kolmému rozptylu zobrazuje všechny životaschopné buňky. CD38 je aktivační marker. Nejvyšší úroveň exprese je na plazmatických buňkách, mírná úroveň exprese na nezralýchmyeloidních a lymfoidních progenitorech, nízká úroveň exprese je na monocytech (zelená) a proměnlivě nízká úroveň exprese je na aktivovaných zralých lymfocytech (červená).

Obrázek 11: Tento bodový graf CD34 proti kolmému rozptylu zobrazuje všechny životaschopnébuňky.CD34 jemarkerčasnýchhematopoetickýchprogenitorů.Typicky je exprimován na myeloidních blastech, nezralých B- a T-buňkách (lymfoblastech). Zralé granulocyty, monocyty a lymfocyty jsou negativní na CD34. CD34 pozitivní progenitory normálně v periferní krvi představují méně než 0,01 % bílých krvinek.

Obsah > Bez imunofenotypické abnormality > Případ č. 1: Normální plná krev

Na každé události záleží

27

Beckman Coulter • Panely ClearLLab 10C • C33359 AB