ClearLLab 10C - Wersja Polska

KOMBINACJE PRZECIWCIAŁ CE DO ANALIZY BIAŁACZKI/CHŁONIAKA* P ANELE C LEAR LL AB 10C

OPIS PRZYPADKÓW

Każde zdarzenie ma znaczenie * Tylko chłoniak nieziarniczy

1

Beckman Coulter • Panele ClearLLab 10C • C33361 AB

SPIS TREŚCI

WPROWADZENIE................................................................................... 3 TŁO.............................................................................................................. 3 UZGODNIONE ZALECENIA DOTYCZĄCE IMMUNOFENOTYPOWANIA................................................................4 PRZEZNACZENIE PANELI CLEARLLAB 10C.................................4 PANELE CLEARLLAB 10C....................................................................4 ZESTAW KOMPENSACYJNY CLEARLLAB...................................... 5 WYBÓR I INTERPRETACJA PRZYPADKU....................................... 5 POWIĄZANE DOKUMENTY................................................................ 6 PIŚMIENNICTWO.................................................................................... 6 PRZYPADKI............................................................................................... 7 BRAK NIEPRAWIDŁOWOŚCI IMMUNOFENOTYPOWANIA...... 7 OBWODOWA KREW PEŁNA...........................................................7 Przypadek nr 1: Prawidłowa krew pełna................................... 7 SZPIK KOSTNY..................................................................................... 32 Przypadek nr 2: Prawidłowy szpik kostny.............................32 WĘZEŁ CHŁONNY..............................................................................56 Przypadek nr 3: Prawidłowy węzeł chłonny....................... 56 PROCES NOWOTWOROWY POCHODZĄCY Z KOMÓREK B...................................................................................... 80 BIAŁACZKA LIMFOBLASTYCZNA Z KOMÓREK B / CHŁONIAK LIMFOBLASTYCZNY.................................................80 Przypadek nr 4: Ostra białaczka limfoblastyczna z komórek B / chłoniak limfoblastyczny...............................80 BIAŁACZKA LIMFOBLASTYCZNA Z KOMÓREK B / CHŁONIAK LIMFOBLASTYCZNY............................................... 105 Przypadek nr 5: Ostra białaczka limfoblastyczna z komórek B / chłoniak limfoblastyczny..............................105 PRZEWLEKŁA BIAŁACZKA LIMFATYCZNA / CHŁONIAK Z MAŁYCH LIMFOCYTÓW................................... 130 Przypadek nr 6: Przewlekła białaczka limfatyczna / chłoniak z małych limfocytów.....................130 PRZEWLEKŁA BIAŁACZKA LIMFATYCZNA / CHŁONIAK Z MAŁYCH LIMFOCYTÓW....................................154 Przypadek nr 7: Przewlekła białaczka limfatyczna / chłoniak z małych limfocytów.....................154 CHŁONIAK Z KOMÓREK PŁASZCZA.......................................178 Przypadek nr 8: Chłoniak z komórek płaszcza.................178 SZPICZAK PLAZMOCYTOWY.................................................... 202 Przypadek nr 9: Szpiczak plazmocytowy...........................202 CHŁONIAK GRUDKOWY...............................................................226 Przypadek nr 10: Chłoniak grudkowy....................................226

CHŁONIAK Z KOMÓREK B POCHODZĄCY Z OŚRODKA ROZMNAŻANIA.................................................... 250 Przypadek nr 11: Chłoniak z komórek B pochodzący z ośrodka rozmnażania.................................... 250 CHŁONIAK Z DOJRZAŁYCH KOMÓREK B...........................274 Przypadek nr 12: Chłoniak z dojrzałych komórek B......274 CHŁONIAK Z DOJRZAŁYCH KOMÓREK B...........................298 Przypadek nr 13: Chłoniak z dojrzałych komórek B......298 PROCES NOWOTWOROWY POCHODZĄCY Z KOMÓREK T.....................................................................................322 BIAŁACZKA LIMFOBLASTYCZNA Z KOMÓREK T / CHŁONIAK LIMFOBLASTYCZNY Z KOMÓREK T..............322 Przypadek nr 14: Białaczka limfoblastyczna z komórek T / chłoniak limfoblastyczny z komórek T....322 BIAŁACZKA LIMFOBLASTYCZNA Z KOMÓREK T / CHŁONIAK LIMFOBLASTYCZNY Z KOMÓREK T............. 346 Przypadek nr 15: Białaczka limfoblastyczna z komórek T / chłoniak limfoblastyczny z komórek T... 346 CHŁONIAK Z DUŻYCH ZIARNISTYCH LIMFOCYTÓW T.................................................................................370 Przypadek nr 16: Zaburzenie limfoproliferacyjne komórek T..............................................................................................370 CHŁONIAK Z DUŻYCH ZIARNISTYCH LIMFOCYTÓW T................................................................................ 394 Przypadek nr 17: Zaburzenie limfoproliferacyjne komórek T............................................................................................. 394 PROCES NOWOTWOROWY POCHODZĄCY Z KOMÓREK MIELOIDALNYCH...................................................... 418 OSTRA BIAŁACZKA SZPIKOWA................................................418 Przypadek nr 18: Ostra białaczka szpikowa........................418 OSTRA BIAŁACZKA SZPIKOWA.............................................. 442 Przypadek nr 19: Ostra białaczka monocytarna............ 442 OSTRA BIAŁACZKA SZPIKOWA..............................................466 Przypadek nr 20: Ostra białaczka szpikowa-NOS........466 OSTRA BIAŁACZKA SZPIKOWA..............................................490 Przypadek nr 21: Ostra białaczka promielocytowa.......490 OSTRA BIAŁACZKA SZPIKOWA................................................514 Przypadek nr 22: Ostra białaczka monocytarna.............514 ZESPÓŁ MIELODYSPLASTYCZNY............................................538 Przypadek nr 23: Zespół mielodysplastyczny..................538 ZESPÓŁ MIELODYSPLASTYCZNY............................................562 Przypadek nr 24: Zespół mielodysplastyczny..................562

Każde zdarzenie ma znaczenie

2

Beckman Coulter • Panele ClearLLab 10C • C33361 AB

WPROWADZENIE Niniejszy opis przypadków (ang. casebook) jest przewidziany jako pomoc w analizowaniu danych immunofenotypowania z cytometrii przepływowej wygenerowanych za pomocą noszących oznaczenie CE-IVD odczynników paneli ClearLLab 10C firmy Beckman Coulter do analizy białaczki i chłoniaka na cytometrach przepływowych Navios i Navios EX firmy Beckman Coulter. Opis przypadków zawiera przykładowe przypadki o charakterystycznych spostrzeżeniach typowych dla różnych nowotworów limfoidalnych i mieloidalnych — na przykład przypadki pacjentów ze spostrzeżeniami klinicznymi i/lub laboratoryjnymi, które sugerują powodujący je proces nowotworowy — ale w których nie zidentyfikowano żadnej nieprawidłowości immunofenotypowania. Typy materiałów badanych obejmują obwodową krew pełną, szpik kostny oraz węzły chłonne. Każdy przypadek zawiera winietę kliniczną, która opisuje dane demograficzne pacjenta i historię kliniczną, właściwe dla przypadku pliki danych w trybie listy przeznaczone do ponownej analizy przez użytkownika konkretnego opisu przypadków, protokoły analizy właściwe dla panelu ClearLLab 10C przeznaczone do użytku z danymi w trybie listy, a także raport przedstawiający analizę z udostępnionymi protokołami. Każdy raport zawiera uwagi dotyczące analizy, które podkreślają spostrzeżenia z immunofenotypowania, a także potencjalne pułapki, które mogą się kryć w takich spostrzeżeniach. UWAGA: Przykłady przedstawione w opisie przypadków mają wyłącznie charakter ilustracyjny i nie reprezentują wszystkich kategorii nowotworów hematolimfoidalnych ani nie przedstawiają wszystkich możliwych wariantów immunofenotypowych. TŁO Immunofenotypowanie metodą cytometrii przepływowej ocenia obecność i brak swoistych antygenów dla każdej pojedynczej komórki obecnej w próbce. Podsumowując, wyniki te generują profil immunogenotypowy dla każdej komórki, który jest albo zgodny ze spodziewaną populacją (tj. prawidłowy) albo niezgodny ze spodziewaną populacją (tj. nieprawidłowy) w tym typie próbki. Ocena próbek od pacjentów z podejrzeniem nowotworów hematolimfoidalnych obejmuje kilka etapów 1 :

• Ocena wszystkich populacji komórek w próbce.

• Przydział każdej populacji na „prawidłową” lub „nieprawidłową”.

• Szczegółowa charakteryzacja populacji nieprawidłowej według obecności lub braku antygenów oraz zwiększenia lub zmniejszenia intensywności barwienia przeciwciał znakowanych fluorochromem. • Interpretacja immunofenotypu nieprawidłowego, zawierająca w miarę możliwości informacje, takie jak wywiad kliniczny, histologia, cytologia, immunohistochemia i badania genotypowania, takie jak hybrydyzacja in situ, kariotypowanie oraz diagnostyka molekularna.

Każde zdarzenie ma znaczenie

3

Beckman Coulter • Panele ClearLLab 10C • C33361 AB

UZGODNIONE ZALECENIA DOTYCZĄCE IMMUNOFENOTYPOWANIA Uzgodnione zalecenia dotyczące immunofenotypowanie metodą cytometrii przepływowej próbek od pacjentów ze znanymi lub podejrzewanymi nowotworami hematolimfoidalnymi pojawiły się w ciągu ostatnich dwóch dekad i w literaturze naukowej opublikowano kilka wytycznych. Immunofenotypowanie metodą cytometrii przepływowej włączono do klasyfikacji WHO guzów hematopoetycznych i tkanek limfoidalnych w roku 2008 2 . Wskazania medyczne i walidacja oznaczenia cytometrii przepływowej, w tym szczegóły przedanalityczne, analityczne i postanalityczne badania są opisane w zaleceniach Bethesda International Consensus Conference z 2006 r. 3,4,5 oraz wytycznych praktyk ICSH/ICCS dla komórkowych oznaczeń immunofluorescencyjnych 6,7,8 . PRZEZNACZENIE PANELI ClearLLab 10C Panele ClearLLab 10C są przeznaczone do stosowania w diagnostyce in vitro na potrzeby jakościowej analizy populacji komórek na podstawie immunofenotypowania wieloparametrycznego w cytometrach przepływowych Navios i Navios EX. Odczynniki te są wykorzystywane jako pomoc w diagnostyce różnicowej pacjentów z odbiegającymi od normy wynikami hematologicznymi, u których stwierdzono lub podejrzewa się następujące nowotwory układu hematopoetycznego: białaczka przewlekła, białaczka ostra, chłoniak nieziarniczy, szpiczak, zespół mielodysplastyczny (ang. Myelodysplastic Syndrome, MDF) i/lub zespoły mieloproliferacyjne (ang. Myeloproliferative Neoplasms, MPN). Odczynniki mogą być stosowane z próbkami obwodowej krwi pełnej (pobranej do K 2 EDTA, roztworu ACD (ang. Acid Citrate Dextrose) lub heparyny), szpiku kostnego (pobranego do K 2 EDTA, ACD lub heparyny) albo próbkami węzłów chłonnych. Interpretację wyników powinien potwierdzić patolog lub równoważny specjalista, który powinien również uwzględnić inne spostrzeżenia kliniczne oraz laboratoryjne. Opisywane odczynniki umożliwiają uzyskiwanie wieloparametrycznych wyników jakościowych dotyczących następujących antygenów powierzchniowych:

Panele ClearLLab 10C

Laser niebieski

Laser czerwony

Laser fioletowy

APC- A750 PB KRO

Nr kat.

Probówka

FITC PE ECD PC5.5 PC7 APC APC- A700

Probówka do badania komórek B Probówka do badania komórek T Probówka do badania komórek M1 Probówka do badania komórek M2

B96805

Kappa Lambda CD10 CD5 CD200 CD34 CD38 CD20 CD19 CD45

B96806

CD4

CD2 CD56 CD5 CD34 CD7

CD8

CD3 CD45

TCR γδ

B96807

CD16

CD7

CD10 CD13 CD64 CD34 CD14 HLA-DR CD11b CD45

B96808

CD15

CD123 CD117 CD13 CD33 CD34 CD38 HLA-DR CD19 CD45

Każde zdarzenie ma znaczenie

4

Beckman Coulter • Panele ClearLLab 10C • C33361 AB

ZESTAW KOMPENSACYJNY ClearLLab

Laser niebieski

Laser czerwony

Laser fioletowy

APC- A750 PB KRO

Nr kat.

FITC

PE

ECD PC5.5

PC7

APC APC- A700

B74074

CD4

CD4

CD3

CD4

CD4

CD4

CD4

CD4

CD4

CD8

Powyższy odczynnik jest dostarczanywustandaryzowanym formacie do stosowania z odczynnikami do przygotowywania próbki i konfiguracji cytometru wraz z oprogramowaniem do akwizycji i analizy danych. Panele ClearLLab 10C spełniają zalecenia standaryzacji określone w wytycznych Bethesda 2 . Dodatkowe informacje dotyczące paneli ClearLLab 10C są dostępne pod adresem beckman.com/ClearLLab . WYBÓR I INTERPRETACJA PRZYPADKU Dane przedstawione w niniejszym opisie przypadkówwygenerowano zgodnie z procedurą wyszczególnioną w instrukcji użycia panelu ClearLLab 10C dostępną pod adresem beckman.com . Reprezentatywne przypadki zostały wybrane z danych badań klinicznych oraz sprawdzone, opisane i zinterpretowane przez następujące osoby:

Brent Wood MD PhD Professor, Laboratory Medicine and Pathology Division Head, Hematopathology Director, Hematopathology Laboratory and SCCA Pathology Medical Director, SCCA Laboratories University of Washington, Seattle, WA, USA

Xueyan Chen, MD, PhD Assistant Professor, Laboratory Medicine Associate Director, Hematopathology Laboratory University of Washington, Seattle, WA

Yi Zhou, MD PhD Assistant Professor

Department of Laboratory Medicine University of Washington, Seattle, WA

Protokoły analizy: Pobrać protokół analizy: ClearLLab 10C. Analiza: Pobrać pliki analizy Kaluza C dotyczące przypadku.

Każde zdarzenie ma znaczenie

5

Beckman Coulter • Panele ClearLLab 10C • C33361 AB

PIŚMIENNICTWO 1. Flow Cytometric Immunophenotyping for Hematologic Neoplasms. F.E. Craig, K.A. Foon. Blood. 2008; 111; 3941-3967. 2. Swerdlow SH, Campo E, Harris NL, Jaffe EA, Pileri SA, Stain H, Thiele J, & Vardiman JW (eds) (2008) WHO Classification of Tumors of Haematopoietic and Lymphoid Tissues. IARC Press: Lyon 3. The 2016 revision of the World Health Organization classification of lymphoid neoplasms. Swerdlow SH, et al. Blood. 2016;127:2375-90. 4. The 2016 revision of the World Health Organization classification of myeloid neoplasms and acute leukemia. Arber DA, et al. Blood 2016 127:2391-2405. 5. 2006 Bethesda International Consensus recommendations on the immunophenotypic analysis of hematolymphoid neoplasia by flow cytometry: optimal reagents and reporting for the flow cytometric diagnosis of hematopoietic neoplasia. Wood BL, Arroz M, Barnett D, DiGiuseppe J, Greig B, Kussick SJ, Oldaker T, Shenkin M, Stone E, Wallace P. Cytometry B Clin Cytom. 2007;72 Suppl 1:S14-22 6. 2006 Bethesda International Consensus recommendations on the flow cytometric immunophenotypic analysis of hematolymphoid neoplasia: medical indications. Davis BH, Holden JT, Bene MC, Borowitz MJ, Braylan RC, Cornfield D, Gorczyca W, Lee R, Maiese R, Orfao A, Wells D, Wood BL, Stetler-Stevenson M. Cytometry B Clin Cytom. 2007;72 Suppl 1:S5-13 7. 2006 Bethesda International Consensus Conference on Flow Cytometric Immunophenotyping of Hematolymphoid Neoplasia. Stetler-Stevenson M, Davis B, Wood B, Braylan R. Cytometry B Clin Cytom. 2007;72 Suppl 1:S3 8. Validation of cell-based fluorescence assays: practice guidelines from the ICSH and ICCS - part III - analytical issues. Tanqri S, Vall H, Kaplan D, Hoffman B, Purvis N, Porwit A, Hunsberger B, Shankey TV; ICSH/ICCS Working Group. Cytometry B Clin Cytom. 2013 Sep-Oct;84(5):291-308. doi: 10.1002/cyto.b.21106 9. Validation of cell-based fluorescence assays: practice guidelines from the ICSH and ICCS - part IV - postanalytic considerations. Barnett D, Louzao R, Gambell P, De J, Oldaker T, Hanson CA; ICSH/ICCS Working Group. Cytometry B Clin Cytom. 2013 Sep-Oct;84(5):309-14. doi: 10.1002/cyto.b.21107 10. Validation of cell-based fluorescence assays: practice guidelines from the ICSH and ICCS - part V - assay performance criteria. Wood B, Jevremovic D, Béné MC, Yan M, Jacobs P, Litwin V; ICSH/ICCS Working Group. Cytometry B Clin Cytom. 2013 Sep-Oct;84(5):315-23. doi: 10.1002/cyto.b.2110 POWIĄZANE DOKUMENTY • ClearLLab 10C Application System Guide (Przewodnik po systemie ClearLLab 10C), nr kat. C28527AA • Kaluza C Flow Cytometry Software Instructions For Use (Instrukcja użycia oprogramowania do cytometrii przepływowej Kaluza C), nr kat. C20165 • Navios Flow Cytometer Instructions For Use (Instrukcja użycia cytometru przepływowego Navios), nr kat. 774515AG • Navios EX Flow Cytometer Instructions For Use (Instrukcja użycia cytometru przepływowego Navios EX), nr kat. B77119AC • ClearLLab 10C Panels Instructions For Use (Instrukcja użycia paneli ClearLLab 10C), nr kat. C00197 • ClearLLab Compensation Beads Instructions For Use (Instrukcja użycia kulek kompensacyjnych ClearLLab), nr kat. C00201 • ClearLLab Compensation Kit Instructions For Use (Instrukcja użycia zestawu kompensacyjnego ClearLLab), nr kat. B74074 • ClearLLab Control Cells Instructions For use (Instrukcja użycia komórek kontrolnych ClearLLab), nr kat. B99884 • ClearLLab Control Cells QC Analysis Protocols Download Addendum (Dodatek dotyczący pobierania protokołów analizy KJ komórek kontrolnych ClearLLab), nr kat. C33269AA

Każde zdarzenie ma znaczenie

6

Beckman Coulter • Panele ClearLLab 10C • C33361 AB

PRZYPADKI

Wobec przypadków zastosowano następujące bramkowanie pierwszeństwa kolorów:

Limfocyty (bramka Ly)/komórki NK: czerwony Komórki CD19+ B: pomarańczowy Komórki T CD3+: morski

Monocyty (bramka Mo): zielony Granulocyty (bramka Gr): niebieski CD45dim: purpurowy

Dodatkowe populacje nieprawidłowe: niebieskozielony Populacja CD45 ujemna: szary

BRAK NIEPRAWIDŁOWOŚCI IMMUNOFENOTYPOWANIA Cytometria przepływowa to sposób charakteryzowania populacji leukocytów. Może pomoc w diagnostyce różnicowej pacjentów z odbiegającymi od normy wynikami hematologicznymi, u których stwierdzono lub podejrzewa się nowotwory układu hematopoetycznego, między innymi takie jak białaczka przewlekła, białaczka ostra, chłoniak nieziarniczy, szpiczak, zespół mielodysplastyczny (ang. Myelodysplastic Syndrome, MDS) i/lub zespoły mieloproliferacyjne (ang. Myeloproliferative Neoplasm, MPN). Kluczowe w identyfikowaniu populacji nieprawidłowych w tych sytuacjach klinicznych jest zapoznanie się z populacjami komórek prawidłowych obecnymi w próbkach tkanek krwi pełnej, szpiku kostnego i węzłów chłonnych. Poniżej znajdują się przykłady próbek prawidłowych barwionych przy użyciu paneli ClearLLab 10C.

OBWODOWA KREW PEŁNA Przypadek nr 1: Prawidłowa krew pełna

Winieta kliniczna Ten 65-letni mężczyzna ma trombocytopenię. Próbka obwodowej krwi pełnej jest poddawana immunofenotypowaniu

metodą cytometrii przepływowej z użyciem paneli ClearLLab 10C. Immunofenotypowanie metodą cytometrii przepływowej

Probówka do badania komórek B

Ryc. 1: Tenwykres czasuwobec CD45 jest niebramkowany i pokazujewszystkie zdarzenia zebrane sekwencyjnie. Tenwykres jest przeznaczony do oceny pod kątemzaburzeń płynu w trakcie akwizycji próbki. Stabilna akwizycja jest oznaczona jednorodnym wzorcem zdarzeńw czasie. Zdarzenia odchylające się od stabilnegowzorcamogą być wykluczone w bramce Time (Czas).

Ryc.2:TenwykrespunktowyFS INT(Rozpraszaniedoprzodu—natężenie)wobecFSPEAK (Rozpraszanie do przodu—maks.) przedstawia zdarzenia wbramce Time (Czas). Wykres ten jest przeznaczony do wykluczenia wszystkich dubletów lub agregatów. Zdarzenia singletowe przedstawiają zależność liniową dla INT wobec PEAK i są uwzględnione w bramce Singlets (Singlety), natomiast dublety leżą poza zależnością liniową.

Spis treści > Brak nieprawidłowości immunofenotypowania > Przypadek nr 1: Prawidłowa krew pełna

Każde zdarzenie ma znaczenie

7

Beckman Coulter • Panele ClearLLab 10C • C33361 AB

Probówka do badania komórek B

Ryc. 3: Ten wykres punktowy rozpraszania bocznego wobec rozpraszania do przodu przedstawia zdarzenia w bramce Singlets (Singlety). Ten wykres ma wykluczyć resztki komórek, które zazwyczaj mają zmniejszone rozpraszanie do przodu. Wczesne komórki apoptotyczne mają umiarkowanie zwiększone rozpraszanie boczne, natomiast późne komórki apoptotyczne i martwicze mają zmienne zmniejszenie rozpraszania bocznego. Komórki żywe są uwzględnione w bramce Cells (Komórki).

Ryc. 4: Tenwykres punktowy CD45wobec rozpraszania bocznego przedstawia zdarzenia wbramceCells(Komórki).Tenwykresmanaceluzaznaczyćróżnepodzbiorykrwinekbiałych, które są bramkowane jako CD45 dodatnie. Populacja CD45 ujemna zazwyczaj zawiera krwinki czerwone, agregaty płytek krwi, resztki tkanek lub komórki niehematopoetyczne.

Ryc. 6: Ten wykres punktowy CD19wobec rozpraszania bocznego przedstawia zdarzenia w bramce Cells (Komórki). Bramka CD19+ identyfikuje bramki CD19 dodatnie. CD19 ulega ekspresji na dojrzałych i niedojrzałych komórkach B oraz na większości komórek plazmatycznych. Komórki te zazwyczaj wykazują rozpraszanie boczne od niskiego do umiarkowanego.

Ryc. 5: Tenwykres punktowy CD45wobec rozpraszania bocznego przedstawia zdarzenia w bramce CD45+. Ten wykres punktowy umożliwia rozróżnianie kilku populacji krwinek białych zazwyczaj występującychwpróbkach krwi obwodowej, szpiku kostnego i węzłów chłonnych, w tym limfocytów (bramka Ly, czerwony/pomarańczowy), monocytów (bramkaMo,zielony) igranulocytów(bramkaGr,niebieski).BramkaCD45dim(purpurowy) pokrywa obszar zazwyczaj zajmowany przez wczesne komórki progenitorowe, tj. mieloblasty i niedojrzałe komórki B. Wobszarze tymmogą również pojawiać się bazofile, plazmocytoidalne komórki dendrytyczne, komórki plazmatyczne i komórki NK. Stosując różne kolory dla zdarzeń objętych przez każdą bramkę, w ramach analizy można zidentyfikować różne populacje.

Spis treści > Brak nieprawidłowości immunofenotypowania > Przypadek nr 1: Prawidłowa krew pełna

Każde zdarzenie ma znaczenie

8

Beckman Coulter • Panele ClearLLab 10C • C33361 AB

Probówka do badania komórek B

Ryc. 7: Tenwykres punktowy kappawobec rozpraszania bocznego przedstawiawszystkie żywe komórki. Powierzchniowy łańcuch kappa ulega ekspresji na dojrzałych komórkach B (pomarańczowy) i niedojrzałych komórkach B późnej fazy. Odsetek kappa dodatnich komórek B jest zazwyczaj większy niż kappa ujemnych (lambda dodatnich) komórek B. Pozorna dodatniość kappa widoczna na monocytach (zielony) jest spowodowana wiązaniem immunoglobuliny za pośrednictwem receptora Fc. Dodatnie pod względem łańcucha lekkiego kappa komórki są widoczne po prawej stronie wykresu.

Ryc.8:Tenwykrespunktowy lambdawobecrozpraszaniabocznegoprzedstawiawszystkie żywe komórki. Powierzchniowy łańcuch lekki lambda ulega ekspresji na dojrzałych komórkach B (pomarańczowy) i niedojrzałych komórkach B późnej fazy. Odsetek lambda dodatnich komórek B jest zazwyczaj mniejszy niż lambda ujemnych (kappa dodatnich) komórek B. Pozorna dodatniość lambda widoczna na monocytach (zielony) jest spowodowanawiązaniem immunoglobuliny za pośrednictwemreceptora Fc. Dodatnie podwzględem łańcucha lekkiego lambda komórki sąwidoczne po prawej stroniewykresu.

Ryc. 9: Tenwykres punktowy CD10wobec rozpraszania bocznego przedstawia wszystkie żywekomórki.CD10ulegaekspresjinaniedojrzałychkomórkachB,dojrzałychkomórkachB ośrodka rozmnażania oraz dojrzałych granulocytach (niebieski). Granulocyty wykazują wysokie rozpraszanie boczne w odróżnieniu od komórek limfoidalnych, które wykazują niskie rozpraszanie boczne.

Ryc. 10: Ten wykres punktowy CD5 wobec rozpraszania bocznego przedstawia wszystkie żywekomórki.CD5ulegaekspresjinaniedojrzałych iniedojrzałychkomórkachT(czerwony, u dołu po prawej) oraz słabo na podzbiorze dojrzałych komórek B (pomarańczowy). Te komórki limfoidalne zazwyczaj wykazują niskie rozpraszanie boczne.

Spis treści > Brak nieprawidłowości immunofenotypowania > Przypadek nr 1: Prawidłowa krew pełna

Każde zdarzenie ma znaczenie

9

Beckman Coulter • Panele ClearLLab 10C • C33361 AB

Probówka do badania komórek B

Ryc. 11: Ten wykres punktowy CD200 wobec rozpraszania bocznego przedstawia wszystkie żywe komórki. CD200 zazwyczaj ulega ekspresji na komórkach B, ale niektóre nowotworowe komórki B są ujemne pod tymwzględem. Jest on szczególnie użyteczny wrozróżnianiuchłoniakazkomórekpłaszcza(zazwyczajCD200ujemnych)odprzewlekłej białaczki limfatycznej / chłoniaka z małych limfocytów (zazwyczaj CD200 dodatnich).

Ryc. 12: Ten wykres punktowy CD34 wobec rozpraszania bocznego przedstawia wszystkie żywe komórki. CD34 jest markeremwczesnych hematopoetycznych komórek progenitorowych. Ulega on ekspresji na hematopoetycznych komórkach macierzystych, wczesnych mieloidalnych komórkach progenitorowych (mieloblastach) i niedojrzałych komórkach Boraz T (limfoblastach). Dojrzałe granulocyty, monocyty i limfocyty są ujemne podwzględemCD34. Komórki progenitorowe dodatnie podwzględemCD34 zazwyczaj stanowią mniej niż 0,01% krwinek białych we krwi obwodowej.

Ryc. 13: Tenwykres punktowy CD38wobec rozpraszania bocznego przedstawiawszystkie żywe komórki. CD38 jest markerem aktywacji. Ulega on ekspresji w najwyższym stopniu na komórkach plazmatycznych, wumiarkowanymstopniu na niedojrzałychmieloidalnych i limfoidalnych komórkach progenitorowych, w niskim stopniu na monocytach (zielony) i w zmiennym stopniu na aktywowanych dojrzałych limfocytach.

Ryc. 14: Tenwykres punktowy CD20wobec rozpraszania bocznego przedstawiawszystkie żywe komórki. CD20 ulega ekspresji na dojrzałych komórkach B (pomarańczowy) i w zmiennym niskim stopniu na podzbiorze dojrzałych komórek T. Ulega on zmiennej ekspresji na niedojrzałych komórkach Bpóźniejszej fazy. Komórki dodatnie podwzględem CD20 zazwyczaj znajdują sięwbramce Lymphocytes (Limfocyty) z niskim rozpraszaniem bocznym.

Spis treści > Brak nieprawidłowości immunofenotypowania > Przypadek nr 1: Prawidłowa krew pełna

Każde zdarzenie ma znaczenie

10

Beckman Coulter • Panele ClearLLab 10C • C33361 AB

Probówka do badania komórek B

Ryc. 15. Tenwykres punktowy lambdawobec kappa przedstawiawszystkie komórki CD19+. Wczesne niedojrzałe komórki B (purpurowy) nie wykazują ekspresji powierzchniowych łańcuchów lekkich immunoglobulin, tj. są ujemne podwzględem łańcucha lekkiego kappa lub lambda. Dojrzałe komórki B są poliklonalne, wykazując ekspresję łańcucha lekkiego kappa lub lambda. Prawidłowy stosunek kappa do lambda wynosi 1,4 z zakresem od 1 do 2. Powszechne jest zwiększone tło z powodu przylegających immunoglobulin osocza.

Ryc. 16. Ten wykres punktowy CD19 wobec CD20 przedstawia wszystkie komórki na bramce Lymphocytes (Limfocyty) (Ly). Dojrzałe komórki B wykazują ekspresję zarówno CD19, jak i CD20 (pomarańczowy). Niektóre nowotworowe komórki Bmogą wykazywać zmniejszoną ekspresję CD19 lub CD20.

Ryc. 18. Ten wykres punktowy CD38 wobec CD10 przedstawia wszystkie komórki na bramce Lymphocytes (Limfocyty) (Ly). CD38 ulega ekspresji w najwyższym stopniu na komórkach plazmatycznych, wumiarkowanymstopniu na niedojrzałych komórkachBoraz wniskimstopniu na komórkach B ośrodka rozmnażania. Większość dojrzałych komórek B (pomarańczowy) wykazuje niewielką lub brak ekspresji CD38. Komórki T (czerwony) wykazują zmienną ekspresję CD38 zależnie od stanu aktywacji.

Ryc. 17. Ten wykres punktowy CD19 wobec CD10 przedstawia wszystkie komórki na bramce Lymphocytes (Limfocyty) (Ly). Komórki B są CD19 dodatnie (pomarańczowy). CD10 dodatnie dojrzałe komórki B znajdują się w ośrodkach rozmnażania w węzłach chłonnych, amały podzbiór niedojrzałych komórek B późnej fazywystępujewaspiratach krwi obwodowej oraz szpiku kostnego.

Spis treści > Brak nieprawidłowości immunofenotypowania > Przypadek nr 1: Prawidłowa krew pełna

Każde zdarzenie ma znaczenie

11

Beckman Coulter • Panele ClearLLab 10C • C33361 AB

Probówka do badania komórek B

Ryc. 19. Ten wykres punktowy CD20 wobec CD10 przedstawia wszystkie komórki na bramce Lymphocytes (Limfocyty) (Ly). Większość dojrzałych komórek B jednorodnie wykazuje wysoki poziom ekspresji CD20 bez CD10.

Ryc. 20. Ten wykres punktowy CD19 wobec CD5 przedstawia wszystkie komórki na bramce Lymphocytes (Limfocyty) (Ly). CD5 ulega ekspresji na komórkach T (czerwony, u góry po lewej), zmiennej ekspresji w niskim stopniu na podzbiorze prawidłowych dojrzałych komórek B (pomarańczowy) oraz ulega ekspresji na niektórych podzbiorach nowotworowych komórek B.

Ryc. 22. Ten wykres punktowy CD5 wobec CD200 przedstawia wszystkie komórki na bramce Lymphocytes (Limfocyty) (Ly). Większość dojrzałych komórek B w warunkach prawidłowychwykazujeekspresjęCD200,apodzbiórzmiennąekspresjęCD5.Nowotworowe komórki Bwprzewlekłej białaczce limfatycznej / chłoniaku zmałych limfocytówzazwyczaj wykazują ekspresję CD5 i CD200, natomiast chłoniak z komórek płaszcza zazwyczaj wykazuje ekspresję CD5, ale nie CD200.

Ryc. 21. Ten wykres punktowy CD20 wobec CD200 przedstawia wszystkie komórki na bramceLymphocytes(Limfocyty)(Ly).WiększośćdojrzałychkomórekB(pomarańczowy) wykazuje ekspresję CD200 w stopniu niskim do umiarkowanego.

Spis treści > Brak nieprawidłowości immunofenotypowania > Przypadek nr 1: Prawidłowa krew pełna

Każde zdarzenie ma znaczenie

12

Beckman Coulter • Panele ClearLLab 10C • C33361 AB

Probówka do badania komórek T

Ryc. 1: Tenwykres czasuwobec CD45 jest niebramkowany i pokazujewszystkie zdarzenia zebrane sekwencyjnie. Tenwykres jest przeznaczony do oceny pod kątemzaburzeń płynu w trakcie akwizycji próbki. Stabilna akwizycja jest oznaczona jednorodnym wzorcem zdarzeńw czasie. Zdarzenia odchylające się od stabilnegowzorcamogą być wykluczone w bramce Time (Czas).

Ryc.2:TenwykrespunktowyFS INT(Rozpraszaniedoprzodu—natężenie)wobecFSPEAK (Rozpraszanie do przodu—maks.) przedstawia zdarzenia wbramce Time (Czas). Wykres ten jest przeznaczony do wykluczenia wszystkich dubletów lub agregatów. Zdarzenia singletowe przedstawiają zależność liniową dla INT wobec PEAK i są uwzględnione w bramce Singlets (Singlety), natomiast dublety leżą poza zależnością liniową.

Ryc. 3: Ten wykres punktowy rozpraszania bocznego wobec rozpraszania do przodu przedstawia zdarzenia w bramce Singlets (Singlety). Ten wykres ma wykluczyć resztki komórek, które zazwyczaj mają zmniejszone rozpraszanie do przodu ze zwiększonym rozpraszaniembocznym.Wczesne komórki apoptotycznemają umiarkowanie zwiększone rozpraszanie boczne, natomiast późne komórki apoptotyczne i martwiczemają zmienne zmniejszenie rozpraszania bocznego. Komórki żywe są uwzględnione w bramce Cells (Komórki).

Ryc. 4: Tenwykres punktowy CD45wobec rozpraszania bocznego przedstawia zdarzenia wbramce Cells (Komórki). Tenwykresma na celu zaznaczenie różnych podtypówkrwinek białych, które są CD45 dodatnie. Populacja CD45 ujemna zazwyczaj zawiera krwinki czerwone, agregaty płytek krwi lub komórki niehematopoetyczne.

Spis treści > Brak nieprawidłowości immunofenotypowania > Przypadek nr 1: Prawidłowa krew pełna

Każde zdarzenie ma znaczenie

13

Beckman Coulter • Panele ClearLLab 10C • C33361 AB

Probówka do badania komórek T

Ryc. 5: Tenwykres punktowy CD45wobec rozpraszania bocznego przedstawia zdarzenia w bramce CD45+. Ten wykres punktowy umożliwia rozróżnianie kilku populacji krwinek białych zazwyczaj występującychwpróbkach krwi obwodowej, szpiku kostnego i węzłów chłonnych, w tym limfocytów (bramka Ly, czerwony/morski), monocytów (bramka Mo, zielony) i granulocytów (bramka Gr, niebieski). Bramka CD45dim (purpurowy) pokrywa obszar zazwyczaj zajmowany przez mieloblasty i niedojrzałe komórki B. W obszarze tymmogą również wypadać bazofile, plazmocytoidalne komórki dendrytyczne, komórki plazmatyczne i komórki NK. Stosując różne kolory dla zdarzeń objętych przez każdą bramkę, w ramach analizy można śledzić różne populacje.

Ryc. 6: Ten wykres punktowy CD3 wobec rozpraszania bocznego przedstawia wszystkie żywe komórki. Bramka CD3+ identyfikuje komórki z powierzchniową ekspresją CD3 (morski). CD3 jest wysoce swoisty dla komórek T i ulega ekspresji jedynie na powierzchni dojrzałych komórek T i niedojrzałych komórkach T późnej fazy. Komórki te zazwyczaj wykazują rozpraszanie boczne od niskiego do umiarkowanego.

Ryc. 8: Ten wykres punktowy CD4 wobec rozpraszania bocznego przedstawia wszystkie żywe komórki. CD4 ulega ekspresji na podzbiorze niedojrzałych i dojrzałych komórek T wwysokim stopniu (morski). CD4 ulega również ekspresji na komórkachmonocytarnych (zielony) w stopniu niższym niż CD4 dodatnie komórki T.

Ryc. 7: Tenwykres punktowy TCR γδ wobec rozpraszania bocznego przedstawiawszystkie żywe komórki. TCR γδ to podjednostka receptora komórki T i ulega ekspresji na małym podzbiorzecytotoksycznychkomórekT.Komórkitezazwyczajwykazująniskierozpraszanie boczne (morski).

Spis treści > Brak nieprawidłowości immunofenotypowania > Przypadek nr 1: Prawidłowa krew pełna

Każde zdarzenie ma znaczenie

14

Beckman Coulter • Panele ClearLLab 10C • C33361 AB

Probówka do badania komórek T

Ryc. 10: Ten wykres punktowy CD56 wobec rozpraszania bocznego przedstawia wszystkie żywe komórki. CD56 w warunkach prawidłowych ulega ekspresji na dużym podzbiorzekomórekNK(czerwony),komórkachToaktywnościNK(komórkiNK/T) iwielu komórkachTgamma/delta(morski).CD56ulegarównieżczęściowejekspresjinakomórkach monocytarnych (zielony) zarówno w schorzeniach reaktywnych, jak i nowotworowych.

Ryc. 9: Ten wykres punktowy CD2 wobec rozpraszania bocznego przedstawia wszystkie żywe komórki. CD2 to antygen ulegający ekspresji na niemal wszystkich niedojrzałych i dojrzałych komórkach T (morski). CD2 ulega również ekspresji na komórkach NK (czerwony, u dołu po prawej) i w niskim stopniu na monocytach (zielony).

Ryc. 12: Ten wykres punktowy CD34 wobec rozpraszania bocznego przedstawia wszystkie żywe komórki. CD34 jest markeremwczesnych hematopoetycznych komórek progenitorowych. Ulega on ekspresji na hematopoetycznych komórkach macierzystych, wczesnych mieloidalnych komórkach progenitorowych (mieloblastach) i niedojrzałych komórkach Boraz T (limfoblastach). Dojrzałe granulocyty, monocyty i limfocyty są ujemne podwzględemCD34. Komórki progenitorowe dodatnie podwzględemCD34 zazwyczaj stanowią mniej niż 0,01% krwinek białych we krwi obwodowej.

Ryc. 11: Ten wykres punktowy CD5 wobec rozpraszania bocznego przedstawia wszystkie żywe komórki. CD5 ulega ekspresji na większości niedojrzałych i dojrzałych komórek T (morski) i w niskim stopniu na podzbiorze dojrzałych komórek B. Bardzo wczesne niedojrzałe komórki T i komórki T gamma/delta zazwyczaj mają niewielką ekspresję lub brak ekspresji CD5. Niewielki podzbiór komórek NK wykazuje ekspresję CD5.

Spis treści > Brak nieprawidłowości immunofenotypowania > Przypadek nr 1: Prawidłowa krew pełna

Każde zdarzenie ma znaczenie

15

Beckman Coulter • Panele ClearLLab 10C • C33361 AB

Probówka do badania komórek T

Ryc. 13: Tenwykres punktowy CD7 wobec rozpraszania bocznego przedstawia wszystkie żywe komórki. CD7 ulega ekspresji na niedojrzałych komórkach T w najwcześniejszym stadium rozwoju komórek T i utrzymuje się przez okres dojrzewania komórki T ulegając zmiennej ekspresji na dojrzałych komórkach T (morski). Ulega on również jednorodnej ekspresji na komórkach NK (czerwony, u dołu po prawej) i słabej ekspresji na podzbiorze plazmocytoidalnych komórek dendrytycznych i podzbiorze zróżnicowanych, CD34 dodatnich progenitorów linii.

Ryc. 14: Ten wykres punktowy CD8wobec rozpraszania bocznego przedstawia wszystkie żywe komórki. CD8 ulega ekspresji na podzbiorze niedojrzałych i dojrzałych komórek T (morski) i definiuje populację dojrzałych cytotoksycznych komórek T. Ulega on zmiennej ekspresji w niskim stopniu na komórkach NK i komórkach T gamma-delta.

Ryc.15.TenwykrespunktowyCD3wobecCD56przedstawiawszystkiekomórkinabramce Lymphocytes (Limfocyty) (Ly). Komórki T są definiowane przez ekspresję CD3 obecnego na wszystkich dojrzałych komórkach T i nieulegającego ekspresji na komórkach innych linii. Komórki NK z definicji nie wykazują ekspresji powierzchniowej CD3, ale wykazują ekspresję CD56 na dużympodzbiorze (czerwony, u góry po lewej). Niewielkie podzbiory dojrzałychkomórekTrównieżwykazująekspresjęCD56,zwłaszczakomórkiToaktywności komórek NK (komórki NK/T).

Ryc. 16. Tenwykres punktowy CD5wobec CD3 przedstawiawszystkie komórki na bramce Lymphocytes (Limfocyty) (Ly). CD3 i CD5 ulegają jednoczesnej ekspresji na większości dojrzałych komórek T (morski), chociaż niewielki podzbiór cytotoksycznych komórek T mającychmorfologiędużychziarnistych limfocytówczęstowykazujezmniejszonąekspresję lub brak ekspresji CD5. CD5 nie ulega ekspresji na większości komórek NK.

Spis treści > Brak nieprawidłowości immunofenotypowania > Przypadek nr 1: Prawidłowa krew pełna

Każde zdarzenie ma znaczenie

16

Beckman Coulter • Panele ClearLLab 10C • C33361 AB

Probówka do badania komórek T

Ryc. 18. Tenwykres punktowy CD8wobec CD4 przedstawiawszystkie komórki na bramce Lymphocytes (Limfocyty) (Ly). CD3 dodatnie komórki T (morski) zawierają podzbiory CD4 dodatni (pomocnicze) i CD8 dodatni (cytotoksyczne). CD4 dodatnie komórki T zazwyczaj przewyższają liczebnie CD8 dodatnie komórki T ze stosunkiem CD4:CD8 od 1:1 do 4:1 w krwi obwodowej. Niekiedy obecne są również komórki podwójnie ujemne lub podwójnie dodatnie pod względem CD4 i CD8. Podwójnie ujemne komórki T zazwyczaj składająsięwwiększościzkomórekTgamma/delta.Wartozwrócićuwagę,żekomórkiCD4 dodatnie, ale CD3 ujemne (czerwony, pośrodku po lewej) sąmonocytami uwzględnionymi w bramce Lymphocytes (Limfocyty). Pokazuje to, że samo bramkowanie CD45 wobec rozpraszania bocznego nie umożliwia czystej identyfikacji limfocytów.

Ryc. 17. Tenwykres punktowy CD7wobec CD2 przedstawia wszystkie komórki na bramce Lymphocytes (Limfocyty) (Ly). CD2 i CD7 ulegają jednoczesnej ekspresji na znacznej większości dojrzałych komórek T (morski) i komórek NK (czerwony, u góry po prawej).

Ryc. 19. Tenwykres punktowy CD3wobec CD4 przedstawiawszystkie komórki na bramce Lymphocytes (Limfocyty) (Ly). Wszystkie CD4 dodatnie komórki T wykazują ekspresję CD3. Monocyty i plazmocytoidalne komórki dendrytyczne wykazują ekspresję CD4 w niższym stopniu niż CD4 dodatnie komórki T oraz brak ekspresji CD3. Komórki NK nie wykazują ekspresji CD3 ani CD4.

Ryc. 20. Tenwykres punktowy CD3wobec CD8 przedstawiawszystkie komórki na bramce Lymphocytes (Limfocyty) (Ly). Wszystkie CD8 dodatnie komórki T wykazują ekspresję CD3 (morski). Niewielki podzbiór komórekNKwykazuje również ekspresję CD8 (czerwony, u góry po lewej) bez CD3.

Spis treści > Brak nieprawidłowości immunofenotypowania > Przypadek nr 1: Prawidłowa krew pełna

Każde zdarzenie ma znaczenie

17

Beckman Coulter • Panele ClearLLab 10C • C33361 AB

Probówka do badania komórek T

Ryc. 21. Ten wykres punktowy CD3 wobec TCR γδ przedstawia wszystkie komórki na bramce Lymphocytes (Limfocyty) (Ly). Niewielki podzbiór komórek Twykazuje ekspresję TCR gamma/delta, połączoną z jednoczesną ekspresją CD3. Wysoce liniowa zależność międzyCD3 i TCR jest spowodowana ich obecnością jako kompleksu heterodimerycznego mającego stały stosunek 1:1, dzięki czemu zwiększenie ekspresji jednego z nich wiąże się ze zwiększeniem ekspresji drugiego.

Spis treści > Brak nieprawidłowości immunofenotypowania > Przypadek nr 1: Prawidłowa krew pełna

Każde zdarzenie ma znaczenie

18

Beckman Coulter • Panele ClearLLab 10C • C33361 AB

Probówka do badania komórek M1

Ryc. 1: Tenwykres czasuwobec CD45 jest niebramkowany i pokazujewszystkie zdarzenia zebrane sekwencyjnie. Tenwykres jest przeznaczony do oceny pod kątemzaburzeń płynu w trakcie akwizycji próbki. Stabilna akwizycja jest oznaczona jednorodnym wzorcem zdarzeńw czasie. Zdarzenia odchylające się od stabilnegowzorcamogą być wykluczone w bramce Time (Czas).

Ryc.2:TenwykrespunktowyFS INT(Rozpraszaniedoprzodu—natężenie)wobecFSPEAK (Rozpraszanie do przodu—maks.) przedstawia zdarzenia wbramce Time (Czas). Wykres ten jest przeznaczony do wykluczenia wszystkich dubletów lub agregatów. Zdarzenia singletowe przedstawiają zależność liniową dla INT wobec PEAK i są uwzględnione w bramce Singlets (Singlety), natomiast dublety leżą poza zależnością liniową.

Ryc. 4: Tenwykres punktowy CD45wobec rozpraszania bocznego przedstawia zdarzenia wbramceCells(Komórki).Tenwykresmanaceluzaznaczyćróżnepodzbiorykrwinekbiałych, które są bramkowane jako CD45 dodatnie. Populacja CD45 ujemna zazwyczaj zawiera krwinki czerwone, agregaty płytek krwi, resztki tkanek lub komórki niehematopoetyczne.

Ryc. 3: Ten wykres punktowy rozpraszania bocznego wobec rozpraszania do przodu przedstawia zdarzenia w bramce Singlets (Singlety). Ten wykres ma wykluczyć resztki komórek, które zazwyczaj mają zmniejszone rozpraszanie do przodu ze zwiększonym rozpraszaniembocznym.Wczesne komórki apoptotycznemają umiarkowanie zwiększone rozpraszanie boczne, natomiast późne komórki apoptotyczne i martwiczemają zmienne zmniejszenie rozpraszania bocznego. Komórki żywe są uwzględnione w bramce Cells (Komórki).

Spis treści > Brak nieprawidłowości immunofenotypowania > Przypadek nr 1: Prawidłowa krew pełna

Każde zdarzenie ma znaczenie

19

Beckman Coulter • Panele ClearLLab 10C • C33361 AB

Probówka do badania komórek M1

Ryc. 5: Tenwykres punktowy CD45wobec rozpraszania bocznego przedstawia zdarzenia w bramce CD45+. Ten wykres punktowy umożliwia rozróżnianie kilku populacji krwinek białych zazwyczaj występującychwpróbkach krwi obwodowej, szpiku kostnego i węzłów chłonnych, w tym limfocytów (bramka Ly, czerwony), monocytów (bramka Mo, zielony) i granulocytów (bramka Gr, niebieski). Bramka CD45dim (purpurowy) pokrywa obszar zazwyczaj zajmowany przez mieloblasty i niedojrzałe komórki B. Wobszarze tymmogą równieżwypadaćbazofile,plazmocytoidalnekomórkidendrytyczne,komórkiplazmatyczne i komórki NK. Stosując różne kolory dla zdarzeń objętych przez każdą bramkę, w ramach analizy można śledzić różne populacje.

Ryc. 6: Ten wykres punktowy CD16wobec rozpraszania bocznego przedstawia wszystkie żywe komórki. CD16 ulega ekspresji w najwyższym stopniu na dojrzałych granulocytach (niebieski).Większość komórekNKwykazuje ekspresję CD16 (czerwony, u dołu po prawej), podobnie jak podzbiór aktywowanych monocytów (zielony).

Ryc. 8: Tenwykres punktowy CD10wobec rozpraszania bocznego przedstawia wszystkie żywekomórki.CD10ulegaekspresjinaniedojrzałychkomórkachB,dojrzałychkomórkachB ośrodka rozmnażania oraz dojrzałych granulocytach (niebieski). Granulocyty wykazują wysokie rozpraszanie boczne w odróżnieniu od komórek limfoidalnych, które wykazują niskie rozpraszanie boczne.

Ryc. 7: Ten wykres punktowy CD7 wobec rozpraszania bocznego przedstawia wszystkie żywe komórki. CD7 ulega ekspresji na niedojrzałych komórkach T w najwcześniejszym stadium rozwoju komórek T i utrzymuje się przez okres dojrzewania komórki T ulegając zmiennej ekspresji na dojrzałych komórkach T (czerwony, u dołu po prawej). Ulega on również ekspresji na komórkach NK i słabej ekspresji na podzbiorze plazmocytoidalnych komórek dendrytycznych i podzbiorze zróżnicowanych progenitorów linii.

Spis treści > Brak nieprawidłowości immunofenotypowania > Przypadek nr 1: Prawidłowa krew pełna

Każde zdarzenie ma znaczenie

20

Beckman Coulter • Panele ClearLLab 10C • C33361 AB

Probówka do badania komórek M1

Ryc. 9: Tenwykres punktowy CD13wobec rozpraszania bocznego przedstawia wszystkie żywekomórki.CD13ulegaekspresjinadojrzewającychgranulocytach(niebieski),dojrzałych monocytach (zielony) i mieloidalnych komórkach progenitorowych (purpurowy).

Ryc. 10: Tenwykres punktowy CD64wobec rozpraszania bocznego przedstawiawszystkie żywekomórki.CD64ulegaekspresjiwswymnajwyższymstopniunadojrzałychmonocytach (zielony). CD64 nie ulega dobrej ekspresji na spoczynkowych dojrzałych granulocytach (niebieski), ale jego ekspresja zwiększa się wraz z aktywacją granulocytów. CD64 nie ulega ekspresji na limfocytach (czerwony) ani większości CD34 dodatnich komórek progenitorowych. Aktywowane dojrzałe monocyty wykazują ekspresję CD64 w niższym stopniu i mają mniejsze rozpraszanie boczne.

Ryc. 11: Ten wykres punktowy CD34 wobec rozpraszania bocznego przedstawia wszystkie żywe komórki. CD34 jest markeremwczesnych hematopoetycznych komórek progenitorowych. Ulega on ekspresji na hematopoetycznych komórkachmacierzystych, wczesnych mieloidalnych komórkach progenitorowych (mieloblastach) i niedojrzałych komórkachBoraz T (limfoblastach). Dojrzałe granulocyty, monocyty i limfocyty są ujemne podwzględemCD34. Komórki progenitorowe dodatnie podwzględemCD34 zazwyczaj stanowią mniej niż 0,01% krwinek białych we krwi obwodowej.

Ryc. 12: Tenwykres punktowy CD14wobec rozpraszania bocznego przedstawia wszystkie żywekomórki.CD14ulegaekspresjiwwysokimstopniunadojrzałychmonocytach(zielony) iwniskimstopniunadojrzałychgranulocytach(niebieski).Aktywowanedojrzałemonocyty wykazują ekspresję CD14 w niższym stopniu i mają mniejsze rozpraszanie boczne.

Spis treści > Brak nieprawidłowości immunofenotypowania > Przypadek nr 1: Prawidłowa krew pełna

Każde zdarzenie ma znaczenie

21

Beckman Coulter • Panele ClearLLab 10C • C33361 AB

Probówka do badania komórek M1

Ryc.13:TenwykrespunktowyHLA-DRwobecrozpraszaniabocznegoprzedstawiawszystkie żywe komórki. HLA-DR ulega ekspresji na komórkach prezentujących antygen, w tym monocytach (zielony) i plazmocytoidalnych komórkach dendrytycznych. Ulega również ekspresji na CD34 dodatnich komórkach progenitorowych, niedojrzałych i dojrzałych komórkach B oraz aktywowanych komórkach T.

Ryc. 14: Tenwykres punktowy CD11bwobec rozpraszania bocznego przedstawiawszystkie żywe komórki. CD11b ulega ekspresji na granulocytach (niebieski) i monocytach (zielony). CD11b ulega również ekspresji na komórkach NK i bazofilach.

Ryc. 16. Ten wykres punktowy CD16 wobec CD13 przedstawia wszystkie żywe komórki. CD13 ulega ekspresji na granulocytach (niebieski), monocytach (zielony), bazofilach i CD34 dodatnich komórkach progenitorowych. CD16 ulega ekspresji na dojrzewających granulocytach (niebieski) oraz na podzbiorze komórek NK (czerwony, u dołu po prawej).

Ryc. 15. Ten wykres punktowy CD11b wobec CD16 przedstawia wszystkie żywe komórki. CD11b ulega ekspresji na monocytach (zielony), niedojrzałych i dojrzałych granulocytach (niebieski) i komórkach NK (czerwony). CD16 ulega ekspresji na niedojrzałych i dojrzałych granulocytach (niebieski) oraz na podzbiorze komórek NK (czerwony, u góry po prawej). Aktywowane dojrzałe monocyty wykazują ekspresję CD16 w zmiennym stopniu i są CD11b dodatnie.

Spis treści > Brak nieprawidłowości immunofenotypowania > Przypadek nr 1: Prawidłowa krew pełna

Każde zdarzenie ma znaczenie

22

Beckman Coulter • Panele ClearLLab 10C • C33361 AB

Probówka do badania komórek M1

Ryc. 17. Ten wykres punktowy CD13 wobec CD34 przedstawia wszystkie żywe komórki. CD13 ulega ekspresji na granulocytach (niebieski), monocytach (zielony), bazofilach i CD34 dodatnich komórkach progenitorowych. CD34 ulega ekspresji na wczesnych hematopoetycznych komórkach progenitorowych. Dojrzałe granulocyty, monocyty i limfocyty są ujemne pod względem CD34.

Ryc. 18. Ten wykres punktowy CD14 wobec CD64 przedstawia wszystkie żywe komórki. CD64 ulega ekspresji w wysokim stopniu na monocytach (zielony) i w niższym stopniu na granulocytach (niebieski). CD14 ulega ekspresji w wysokim stopniu na monocytach iwniższymstopniunagranulocytach(niebieski).Aktywowanedojrzałemonocytywykazują ekspresję CD14 i CD64 w zmiennie niskim stopniu.

Ryc. 20. Tenwykres punktowy HLA-DRwobec CD10przedstawiawszystkie żywe komórki. HLA-DR ulega ekspresji na monocytach (zielony), komórkach B, plazmocytoidalnych komórkach dendrytycznych i CD34 dodatnich komórkach progenitorowych. CD10 ulega ekspresji na dojrzałych granulocytach (niebieski).

Ryc. 19. Ten wykres punktowy CD14 wobec CD16 przedstawia wszystkie żywe komórki. CD14 ulega ekspresji w wysokim stopniu na monocytach (zielony) i w niższym stopniu na granulocytach (niebieski, u góry po lewej). CD16 ulega ekspresji na granulocytach oraz na podzbiorze komórek NK (czerwony, pośrodku po lewej). Aktywowane dojrzałe monocyty wykazują ekspresję CD14 i CD16 w zmiennie niskim stopniu.

Spis treści > Brak nieprawidłowości immunofenotypowania > Przypadek nr 1: Prawidłowa krew pełna

Każde zdarzenie ma znaczenie

23

Beckman Coulter • Panele ClearLLab 10C • C33361 AB

Probówka do badania komórek M1

Ryc. 21. Ten wykres punktowy CD7 wobec CD13 przedstawia wszystkie żywe komórki. CD7 ulega ekspresji na komórkach T i komórkach NK (czerwony, u dołu po prawej). CD13 ulega ekspresji na granulocytach (niebieski), monocytach (zielony), bazofilach i CD34 dodatnich komórkach progenitorowych. Ogólnie nie jest obserwowana jednoczesna ekspresja CD13 i CD7.

Spis treści > Brak nieprawidłowości immunofenotypowania > Przypadek nr 1: Prawidłowa krew pełna

Każde zdarzenie ma znaczenie

24

Beckman Coulter • Panele ClearLLab 10C • C33361 AB

Probówka do badania komórek M2

Ryc. 1: Tenwykres czasuwobec CD45 jest niebramkowany i pokazujewszystkie zdarzenia zebrane sekwencyjnie. Tenwykres jest przeznaczony do oceny pod kątemzaburzeń płynu w trakcie akwizycji próbki. Stabilna akwizycja jest oznaczona jednorodnym wzorcem zdarzeńw czasie. Zdarzenia odchylające się od stabilnegowzorcamogą być wykluczone w bramce Time (Czas).

Ryc.2:TenwykrespunktowyFS INT(Rozpraszaniedoprzodu—natężenie)wobecFSPEAK (Rozpraszanie do przodu—maks.) przedstawia zdarzenia wbramce Time (Czas). Wykres ten jest przeznaczony do wykluczenia wszystkich dubletów lub agregatów. Zdarzenia singletowe przedstawiają zależność liniową dla INT wobec PEAK i są uwzględnione w bramce Singlets (Singlety), natomiast dublety leżą poza zależnością liniową.

Ryc. 4: Tenwykres punktowy CD45wobec rozpraszania bocznego przedstawia zdarzenia wbramceCells(Komórki).Tenwykresmanaceluzaznaczyćróżnepodzbiorykrwinekbiałych, które są bramkowane jako CD45 dodatnie. Populacja CD45 ujemna zazwyczaj zawiera krwinki czerwone, agregaty płytek krwi, resztki tkanek lub komórki niehematopoetyczne.

Ryc. 3: Ten wykres punktowy rozpraszania bocznego wobec rozpraszania do przodu przedstawia zdarzenia w bramce Singlets (Singlety). Ten wykres ma wykluczyć resztki komórek, które zazwyczaj mają zmniejszone rozpraszanie do przodu. Wczesne komórki apoptotyczne mają umiarkowanie zwiększone rozpraszanie boczne, natomiast późne komórki apoptotyczne i martwicze mają zmienne zmniejszenie rozpraszania bocznego. Komórki żywe są uwzględnione w bramce Cells (Komórki).

Spis treści > Brak nieprawidłowości immunofenotypowania > Przypadek nr 1: Prawidłowa krew pełna

Każde zdarzenie ma znaczenie

25

Beckman Coulter • Panele ClearLLab 10C • C33361 AB