SVM_3_2011

Э кзотические животные •

держащие ген, похожий на pilL , веро- ятно, также содержат ОП в своих гено- мах. Обе шиншиллы, инфицированные сингенойной палочкой, содержащей ген, похожий на pilL , были лаборатор- ными, и эти изоляты были чувствитель- ны ко всем испытанным антибиотикам. Мы также провели тесты на опре- деление продукции металло-бета- лактамаз (МБЛ) во всех изолятах, но результаты были отрицательными. Не было выявлено никакой корреля- ции между ПЭ-типами, серотипами и антибиотикочувствительностью. И хотя при проведении ПЦР и секвенировании не было выявлено генов, кодирующих БЛРС, 2 изолята, содержащие ген pilL , вероятно, являются высоковирулентны- ми штаммами P. aeruginosa. О бсуждение В настоящем исследовании изоля- ты P. aeruginosa выделялись от шин- шилл, не имевших признаков синегной- ной или другой бактериальной инфек- ции, кроме двух лабораторных особей со средним отитом. P. aeruginosa была выделена у 30,4% домашних шиншилл и у 47,7% лабораторных шиншилл. В целом синегнойная палочка была выде- лена у 41,8%клинически здоровых осо- бей. Хотя синегнойный средний отит и его клинические признаки были много- кратно описаны в предыдущих исследо- ваниях [9–12], в нашем исследовании отсутствие симптомов у инфицирован- ныхживотных может быть связано с те- чением латентного периода. В дальней- шем клинические признаки синегной- ной инфекции могли развиться при сни- жении иммунитета. Многие случаи за- ражения шиншилл синегнойной палоч- кой связывают с загрязнением окру- жающей среды: еды, воды, материа- лов клетки. Помимо этого транзитор- ные инфекции могут приводить к бес- симптомным хроническим процессам у шиншилл вследствие копрофагии [21]. Хотя не было никаких свидетельств, что изоляты от шиншилл были гетеро­ генными, серотипирование и пульс- электрофорез позволили разделить изо- ляты на 5 серотипов и 7 ПЭ-типов соот- ветственно. Таким образом, несмотря на небольшое количество, отмечается большое разнообразие изолятов. Мы использовали слайд-агглютинацию для определения серотипа немногомодифи-

Рис. 2. Минимальные подавляющие концентрации (МПК) аминогликозидов в 22 штаммах P. aeruginosa, выделенных у шиншилл (а – гентамицин, б – амикацин).

Рис. 3. Минимальные подавляющие концентрации (МПК) фторхинолонов в 22 штаммах P. aeruginosa, выделенных у шиншилл (а – энрофлоксацин, б – ципрофлоксацин).

выше 16 мкг/мл в 6 и 1 изоляте соот- ветственно. 6 изолятов показали уме- ренную чувствительность к цефтазиди- му. Эти результаты говорят о том, что изоляты, полученные от шиншилл, чув- ствительны к антибиотикам, применяе- мым у животных, но недостаточно чув- ствительны к антибиотикам, применяе- мым в настоящее время у людей. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) и секвенирование Все изоляты были исследованы мето- дом ПЦР для выявления генов, коди- рующих разные типы БЛРС у диких штаммов P. aeruginosa [3, 17]. При ис- следовании с праймерами OXA, TEM, SHV, PER, CTX группы 2, CTX группы 9 и типа VEB ни в одном изоляте не об- наружены БЛРС. При использовании праймеров GES и CTX группы 1 в 9 и 2 изолятах соответственно визуализи- ровались бэнды в ожидаемой локали- зации (данные не представлены). Для исследования точности секвенирова- ния было выполнено ТА-клонирование. Все обнаруженные при использовании праймераGESДНК-вставки были иден- тифицированы как АТФ-связывающие кассеты транспортеров-пермеаз, ко- торые обнаруживаются у различных

штаммов P. aeruginosa, и ни одна не содержала ген, кодирующий бета- лактамазу типа GES. Ни одна из вста- вок, выявленных с помощью праймера CTX группы 1, не содержала ген, коди- рующий бета-лактамазу типа CTX. Од- нако все вставки из 2 ПЦР-ампликонов были очень похожи на ген, кодирую- щий предполагаемый белок PilL, обна- руживаемый у P. aeruginosa (образец ABR13432), с покрытием 82% и мак- симальным соответствием 97%. По- мимо этого все вставки были также по- хожи на ген, кодирующий белок типа IVB, содержащийся в фимбриях синег- нойной палочки (образец YP_792920), с покрытием 81% и максимальным со- ответствием 95%. Оба этих белка были идентифицированы в новом островке патогенности (ОП) у высоковирулент- ных клинических изолятов, включая штаммы PSE9 и PA14 [18–20]. Хотя праймер CTX группы 1 может компле- ментарно соединяться с похожей на ис- комый ген последовательностью нукле- отидов, было подтверждено, что в двух изолятах содержится ген pilL . Хотя мы пытались изолировать плазмиду из двух этих штаммов, ни у одного плазми- ды не было обнаружено. Такие резуль- таты говорят о том, что 2 изолята, со-

42

С О В Р Е М Е Н Н А Я В Е Т Е Р И Н А Р Н А Я М Е Д И Ц И Н А

Made with