Avery. Neonatología Sample

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CAPÍTULO 10 • Diagnóstico y tratamiento prenatales en la era molecular: indicaciones, procedimientos y técnicas de laboratorio 125

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FIGURA 10-7 Cariotipo de trisomía 21 con la técnica de bandas G. La flecha señala al cro- mosoma 21.

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cromosomas, menos bandas se visualizan en el cariotipo. Los cariotipos estándar tienen una resolución de aproximadamente 350 bandas. Con el uso del bandeo G, un citogenetista diestro puede ser capaz de detectar deleciones o duplicaciones de 5 a 10 Mb o más. Otras técnicas de tinción, incluyen a la de bandas Q , donde los cro- mosomas se tiñen con mostaza de quinacrina , que reacciona específi- camente con determinadas bases. La quinacrina se intercala en el DNA cromosómico pero fluoresce de manera más brillante en las regiones ricas en AT. Cuando son observados los cromosomas a través del microscopio de fluorescencia aparecen las bandas características. Con el bandeo C se resaltan las regiones centroméricas y regiones que contienen hete- rocromatina. El bandeo de la región del organizador nucleolar (RON), que contiene genes para mRNA en los brazos cortos de los cromosomas acrocéntricos, permite su visualización. Para analizar apropiadamente los cromosomas en términos de número y contenido genómico, es nece- sario ordenarlos, lo que actualmente se hace utilizando un programa por computadora especializado. En el cariotipo los cromosomas se disponen en pares, alineados de acuerdo con el centrómero, con el brazo corto (p) arriba y el brazo largo (q) abajo (ISCM, 2013). Técnicas de citogenética molecular Además de las técnicas estándar de citogenética, se han originado varios métodos de la interfaz entre ésta y la biología molecular, conocida por lo general como “citogenética molecular”. En general, estas técnicas hacen uso de sondas de DNA con marca fluorescente, que se unen a una región cromosómica específica y, por lo tanto, permiten la valoración de la presen- cia de varios loci genómicos específicos dentro de una célula. Hibridación fluorescente in situ A principios de la década de 1990 se introdujo la HFIS, que actúa como puente entre la citogenética convencional y las pruebas de DNA molecu- AMPLE lares y permite una valoración sensible relativamente rápida del número y localización de grandes fragmentos de cromosomas por visualización directa de regiones específicas al microscopio (92). Se basa en el hecho de que las sondas de DNA de una sola cadena se pueden alinear con cadenas complementarias de DNA para formar una hélice bicatenaria bajo condiciones apropiadas, un proceso llamado hibridación (93). La sonda está constituida por un segmento de DNA específico que incor- pora nucleótidos modificados con marca fluorescente (94). También es posible usar múltiples sondas de HFIS, cada una con un fluorocromo diferente en un solo procedimiento de hibridación. Se puede usar HFIS cuando hay un elevado índice de sospecha clínica de un trastorno rela- cionado con una deleción o duplicación de un gen específico o varios. Por lo tanto, el elemento más crítico de la HFIS es la selección de la sonda específica que ayudará a responder la pregunta clínica. Las sondas de HFIS producen una señal fluorescente en el cromosoma donde hibridizan, esto es, si está presente una señal también lo está el DNA complementario de la sonda. Así, una región cromosómica par pro- duce dos manchas. Las células monosómicas para la región cromosómica (es decir, una deleción) muestran sólo una mancha por núcleo, en tanto las trisómicas presentan tres. Se pueden usar de manera simultánea son- das diferentes para sitios diversos en el genoma. Es importante recordar que un fracaso de la técnica de hibridación puede también dar como resultado una ausencia de señal, lo que constituye un resultado falso positivo. La disminución de resultados falsos positivos se puede lograr por análisis de numerosas células. Una de las principales ventajas de la HFIS sobre los métodos estándar de bandeo es su capacidad de reconocer cambios cromosómicos suti- les, como deleciones o duplicaciones, que causan una alteración en la dosis genética normal (95). Se dispone de sondas comerciales específi- cas de HFIS para reconocer microdeleciones específicas. Por ejemplo, el síndrome de DiGeorge/velocardiofacial, que con frecuencia máxima es

EL FETO COMO PACIENTE