ClearLLab 10C - RU - Русская версия

КОМБИНАЦИИ АНТИТЕЛ CE ДЛЯ АНАЛИЗА НА ЛЕЙКОЗ / ЛИМФОМУ* ПАНЕЛИ C LEAR LL AB 10C

ЖУРНАЛ СЛУЧАЕВ

Каждое событие имеет значение * Только неходжкинская лимфома

1

Beckman Coulter • Панели ClearLLab 10C • C33362 AB

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ.....................................................................................3 НАУЧНАЯ ОСНОВА. ....................................................................3 КОНСЕНСУСНЫЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИММУНОФЕНОТИПИРОВАНИЮ.............................................4 НАЗНАЧЕНИЕ ПАНЕЛЕЙ CLEARLLAB 10C................................4 ПАНЕЛИ CLEARLLAB 10C............................................................4 КОМПЕНСАЦИОННЫЙ НАБОР CLEARLLAB............................5 ВЫБОР И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ СЛУЧАЕВ.....................................5 СОПРОВОДИТЕЛЬНЫЕ ДОКУМЕНТЫ......................................6 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ................................................................6 СЛУЧАИ......................................................................................... 7 ОТСУТСТВИЕ ИММУНОФЕНОТИПИЧЕСКОЙ АНОМАЛИИ. ................................................................................ 7 ПЕРИФЕРИЧЕСКАЯ ЦЕЛЬНАЯ КРОВЬ.................................7 Случай №1: Нормальная цельная кровь......................... 7 КОСТНЫЙ МОЗГ................................................................... 32 Случай №2: Нормальный костный мозг.........................32 ЛИМФАТИЧЕСКИЙ УЗЕЛ..................................................... 56 Случай №3: Нормальный лимфатический узел...........56 НЕОПЛАСТИЧЕСКИЙ ПРОЦЕСС B-КЛЕТОЧНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ....................................................................80 B-ЛИМФОБЛАСТНЫЙ ЛЕЙКОЗ/ B-ЛИМФОБЛАСТНАЯ ЛИМФОМА..................................... 80 Случай №4: Острый B-лимфобластный лейкоз/ B-лимфобластная лимфома..................................................80 B-ЛИМФОБЛАСТНЫЙ ЛЕЙКОЗ/ B-ЛИМФОБЛАСТНАЯ ЛИМФОМА....................................105 Случай №5: Острый B-лимфобластный лейкоз/ B-лимфобластная лимфома............................................... 105 ХРОНИЧЕСКИЙ ЛИМФОЦИТАРНЫЙ ЛЕЙКОЗ/ МАЛАЯ ЛИМФОЦИТАРНАЯ ЛИМФОМА.........................130 Случай №6: Хронический лимфоцитарный лейкоз/ Малая лимфоцитарная лимфома.................................... 130 ХРОНИЧЕСКИЙ ЛИМФОЦИТАРНЫЙ ЛЕЙКОЗ/ МАЛАЯ ЛИМФОЦИТАРНАЯ ЛИМФОМА.........................154 Случай №7: Хронический лимфоцитарный лейкоз/ Малая лимфоцитарная лимфома.................................... 154 ЛИМФОМА ИЗ КЛЕТОК МАНТИИ....................................178 Случай №8: Лимфома из клеток мантии...................... 178 ПЛАЗМОЦИТАРНАЯ МИЕЛОМА...................................... 202 Случай № 9: Плазмоцитарная миелома...................... 202 ФОЛЛИКУЛЯРНАЯ ЛИМФОМА........................................ 226 Случай №10: Фолликулярная лимфома....................... 226

B-КЛЕТОЧНАЯ ЛИМФОМА ИЗ ЗАРОДЫШЕВОГО ЦЕНТРА................................................................................. 250 Случай №11: B-клеточная лимфома из зародышевого центра........................................................ 250 ЛИМФОМА ИЗ ЗРЕЛЫХ B-КЛЕТОК. ................................ 274 Случай №12: Лимфома из зрелых B-клеток................ 274 ЛИМФОМА ИЗ ЗРЕЛЫХ B-КЛЕТОК. ................................ 298 Случай №13: Лимфома из зрелых B-клеток................ 298 НЕОПЛАСТИЧЕСКИЙ ПРОЦЕСС T-КЛЕТОЧНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ..................................................................322 T-ЛИМФОБЛАСТНЫЙ ЛЕЙКОЗ/ЛИМФОБЛАСТНАЯ ЛИМФОМА........................................................................... 322 Случай №14: T-лимфобластный лейкоз/ T-лимфобластная лимфома............................................... 322 T-ЛИМФОБЛАСТНЫЙ ЛЕЙКОЗ/ЛИМФОБЛАСТНАЯ ЛИМФОМА........................................................................... 346 Случай №15: T-лимфобластный лейкоз/ T-лимфобластная лимфома............................................... 346 T-КЛЕТОЧНАЯ ЛИМФОМА ИЗ БОЛЬШИХ ГРАНУЛЯРНЫХ ЛИМФОЦИТОВ....................................... 370 Случай №16: T-клеточное лимфопролиферативное заболевание....................... 370 T-КЛЕТОЧНАЯ ЛИМФОМА ИЗ БОЛЬШИХ ГРАНУЛЯРНЫХ ЛИМФОЦИТОВ....................................... 394 Случай №17: T-клеточное лимфопролиферативное заболевание....................... 394 НЕОПЛАСТИЧЕСКИЙ ПРОЦЕСС МИЕЛОИДНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ.................................................................. 418 ОСТРЫЙ МИЕЛОИДНЫЙ ЛЕЙКОЗ...................................418 Случай №18: Острый миелоидный лейкоз................. 418 ОСТРЫЙ МИЕЛОИДНЫЙ ЛЕЙКОЗ.................................. 442 Случай №19: Острый моноцитарный лейкоз............ 442 ОСТРЫЙ МИЕЛОИДНЫЙ ЛЕЙКОЗ.................................. 466 Случай №20: Острый миелоидный лейкоз — неуточненный........................................................................ 466 ОСТРЫЙ МИЕЛОИДНЫЙ ЛЕЙКОЗ.................................. 490 Случай №21: Острый промиелоцитарный лейкоз......................................................................................... 490 ОСТРЫЙ МИЕЛОИДНЫЙ ЛЕЙКОЗ...................................514 Случай №22: Острый моноцитарный лейкоз............ 514 МИЕЛОДИСПЛАСТИЧЕСКИЙ СИНДРОМ...................... 538 Случай №23: Миелодиспластический синдром....... 538 МИЕЛОДИСПЛАСТИЧЕСКИЙ СИНДРОМ...................... 562 Случай №24: Миелодиспластический синдром....... 562

Каждое событие имеет значение

2

Beckman Coulter • Панели ClearLLab 10C • C33362 AB

ВВЕДЕНИЕ Этот журнал разработан для обеспечения анализа данных иммунофенотипирования проточной цитометрии, созданных с использованием панелей Beckman Coulter ClearLLab 10C маркированного CE-IVD реагента для анализа на лейкоз и лимфому на проточных цитометрах Beckman Coulter Navios и Navios EX. Включены примеры случаев с характерными находками, типичными для разных лимфоидных и миелоидных образований, как случаи от пациентов с клиническими и/или лабораторными находками, которые предполагают фоновый неопластический процесс, но в которых не идентифицировано иммунофенотипической аномалии. Типы образцов включают в себя периферическую цельную кровь, костный мозг и лимфатические узлы. Каждый случай содержит клиническое описание демографических данных пациента и анамнез, специфические для случая файлы данных покадрового просмотра для повторного анализа, специфические протоколы анализа ClearLLab 10C с данными покадрового просмотра и отчет, показывающий анализ с предоставленными протоколами. Каждый отчет содержит заметки по анализу, которые подчеркивают иммунофенотипические находки, как и потенциальные проблемы. ПРИМЕЧАНИЕ. Примеры в журнале случаев приводятся только в целях иллюстрации, и не все категории гематолимфоидных новообразований могут быть представлены, как и не все возможные варианты иммунофенотипирования описаны или продемонстрированы. НАУЧНАЯ ОСНОВА Иммунофенотипирование методом проточной цитометрии оценивает присутствие и отсутствие специфических антигенов для каждойотдельной клетки, присутствующей в образце. В своей совокупности этирезультаты генерируют иммунофенотипический профиль для каждой клетки, который либо согласуется с ожидаемой популяцией (то есть, является нормальным), либо не согласуется с ожидаемой популяцией (то есть, является аномальным) в этом типе пробы. При оценке проб от пациентов с подозреваемыми гематолимфоидными злокачественными новообразованиями выполняют несколько шагов 1 : • Оценка всех клеточных популяций в образце. • Отнесение каждой клеточной популяции к «нормальной» или «аномальной». • Подробное описание аномальной популяции согласно присутствию или отсутствию антигенов, а также повышенной или сниженной интенсивности окрашивания антителами, маркированными флуорохромом. • Интерпретация аномального иммунофенотипа, включающая, когда доступна, дополнительную информацию, такую как анамнез, гистология, цитология, иммуногистохимия и исследования генотипирования, такие как гибридизация in situ, кариотипирование и молекулярная диагностика.

Каждое событие имеет значение

3

Beckman Coulter • Панели ClearLLab 10C • C33362 AB

КОНСЕНСУСНЫЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИММУНОФЕНОТИПИРОВАНИЮ Консенсусные рекомендации по иммунофенотипированию методом проточной цитометрии образцов от пациентов с известными или подозреваемыми гематолимфоидными злокачественными новообразованиями формировались в течение последних двух десятилетий, и несколько руководств было опубликовано в научной литературе. Иммунофенотипирование методом проточной цитометрии было включено в классификацию WHO (ВОЗ) опухолей гематопоэтических и лимфоидных тканей с 2008 г. 2 . Медицинские показания и валидация анализа проточной цитометрии, включая преаналитические, аналитические и постаналитические сведения тестирования, описаны в рекомендациях Международной консенсусной конференции 2006 г. в городе Бетесда 3,4,5 и практических рекомендаций ICSH/ICCS для основанного на клетках анализа флуоресценции 6,7,8 . НАЗНАЧЕНИЕ ПАНЕЛЕЙ ClearLLab 10C Панели ClearLLab 10C предназначены для диагностики in vitro для качественного определения клеточных популяций методом многопараметрического иммунофенотипирования на проточных цитометрах Navios и Navios EX. Данные реагенты могут быть вспомогательными при дифференциальной диагностике у пациентов с гематологическими нарушениями, у которых присутствуют или предполагаются следующие гематопоэтические новообразования: хроническая лейкемия, острая лейкемия, неходжкинская лимфома, миелома, миелодиспластический синдром (МДС) и/или миелопролиферативные неоплазмы (МПН). Реагенты могут использоваться с образцами периферической цельной крови (в пробирках с K 2 EDTA, цитрат декстрозой (ACD) или гепарином), костного мозга (в пробирках с K 2 EDTA, ACD или гепарином) и лимфатических узлов для иммунофенотипирования. Интерпретация результатов должна быть подтверждена патологом или аналогичным специалистом в сочетании с другими клиническими и лабораторными обнаружениями. Данные реагентыпозволяют получитьмногопараметрические количественные результатыдля указанных ниже поверхностных антигенов:

Фиолетовый лазер

ПАНЕЛИ ClearLLab 10C

Синий лазер

Красный лазер

APC- A750

Кат. № Пробирка

FITC

PE

ECD PC5.5 PC7

APC APC- A700

PB KRO

B96805 Пробирка с B-клетками B96806 Пробирка с T-клетками

Kappa

Lambda

CD10

CD5

CD200 CD34

CD38

CD20

CD19 CD45

TCRγδ

CD4

CD2

CD56

CD5

CD34

CD7

CD8

CD3

CD45

B96807 Пробирка с M1-клетками

CD16

CD7

CD10

CD13

CD64

CD34

CD14

HLA-DR CD11b CD45

B96808 Пробирка с M2-клетками

CD15

CD123 CD117 CD13

CD33

CD34

CD38

HLA-DR CD19 CD45

Каждое событие имеет значение

4

Beckman Coulter • Панели ClearLLab 10C • C33362 AB

КОМПЕНСАЦИОННЫЙ НАБОР ClearLLab

Фиолетовый лазер

Синий лазер

Красный лазер

APC- A700

APC- A750

Кат. №

FITC

PE

ECD PC5.5

PC7

APC

PB

KRO

B74074

CD4

CD4

CD3

CD4

CD4

CD4

CD4

CD4

CD4

CD8

Указанный выше реагент предоставляется в стандартизированном формате, чтобы его можно было использовать с реагентами для приготовления пробы и настройки цитометра, вместе с программным обеспечением для получения и анализа данных. Панели ClearLLab 10C отвечают рекомендациям для стандартизации, как изложено в рекомендациях Bethesda 2 . Дополнительная информация относительно панелей ClearLLab 10C доступна в beckman.com/ClearLLab . ВЫБОР И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ СЛУЧАЕВ Данные, представленные в этом журнале случаев, были сгенерированные после процедуры, подробно описанной в ClearLLab 10C Panels Instructions For Use (Инструкция по применению панелей ClearLLab 10C) (IFU), доступной на сайте beckman.com . Типичные случаибыливыбраныиз данных клиническогоисследования ибылипроверены, аннотированыиинтерпретированы

следующими лицами: Brent Wood MD PhD Профессор, лабораторная медицина и патология Руководитель отделения, гемопатология Руководитель, руководитель гемопатологической лаборатории и патологии SCCA

Медицинский директор, лаборатории SCCA University of Washington, Seattle, WA, USA Xueyan Chen, MD, PhD Доцент, лабораторная медицина Помощник руководителя, гемопатологическая лаборатория University of Washington, Seattle, WA Yi Zhou, MD PhD Доцент

Факультет лабораторной медицины University of Washington, Seattle, WA

Протоколы анализа: Загрузить протокол анализа ClearLLab 10C. Анализ: Загрузите специфические для случая файлы анализа Kaluza C.

Каждое событие имеет значение

5

Beckman Coulter • Панели ClearLLab 10C • C33362 AB

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 1. Flow Cytometric Immunophenotyping for Hematologic Neoplasms. F.E. Craig, K.A. Foon. Blood. 2008; 111; 3941-3967. 2. Swerdlow SH, Campo E, Harris NL, Jaffe EA, Pileri SA, Stain H, Thiele J, & Vardiman JW (eds) (2008) WHO Classification of Tumors of Haematopoietic and Lymphoid Tissues. IARC Press: Lyon 3. The 2016 revision of the World Health Organization classification of lymphoid neoplasms. Swerdlow SH, et al. Blood. 2016;127:2375-90. 4. The 2016 revision of the World Health Organization classification of myeloid neoplasms and acute leukemia. Arber DA, et al. Blood 2016 127:2391-2405. 5. 2006 Bethesda International Consensus recommendations on the immunophenotypic analysis of hematolymphoid neoplasia by flow cytometry: optimal reagents and reporting for the flow cytometric diagnosis of hematopoietic neoplasia. Wood BL, Arroz M, Barnett D, DiGiuseppe J, Greig B, Kussick SJ, Oldaker T, Shenkin M, Stone E, Wallace P. Cytometry B Clin Cytom. 2007;72 Suppl 1:S14-22 6. 2006 Bethesda International Consensus recommendations on the flow cytometric immunophenotypic analysis of hematolymphoid neoplasia: medical indications. Davis BH, Holden JT, Bene MC, Borowitz MJ, Braylan RC, Cornfield D, Gorczyca W, Lee R, Maiese R, Orfao A, Wells D, Wood BL, Stetler-Stevenson M. Cytometry B Clin Cytom. 2007;72 Suppl 1:S5-13 7. 2006 Bethesda International Consensus Conference on Flow Cytometric Immunophenotyping of Hematolymphoid Neoplasia. Stetler-Stevenson M, Davis B, Wood B, Braylan R. Cytometry B Clin Cytom. 2007;72 Suppl 1:S3 8. Validation of cell-based fluorescence assays: practice guidelines from the ICSH and ICCS - part III - analytical issues. Tanqri S, Vall H, Kaplan D, Hoffman B, Purvis N, Porwit A, Hunsberger B, Shankey TV; ICSH/ICCS Working Group. Cytometry B Clin Cytom. 2013 Sep-Oct;84(5):291-308. doi: 10.1002/cyto.b.21106 9. Validation of cell-based fluorescence assays: practice guidelines from the ICSH and ICCS - part IV - postanalytic considerations. Barnett D, Louzao R, Gambell P, De J, Oldaker T, Hanson CA; ICSH/ICCS Working Group. Cytometry B Clin Cytom. 2013 Sep-Oct;84(5):309-14. doi: 10.1002/cyto.b.21107 10. Validation of cell-based fluorescence assays: practice guidelines from the ICSH and ICCS - part V - assay performance criteria. Wood B, Jevremovic D, Béné MC, Yan M, Jacobs P, Litwin V; ICSH/ICCS Working Group. Cytometry B Clin Cytom. 2013 Sep-Oct;84(5):315-23. doi: 10.1002/cyto.b.2110 • ClearLLab 10C Panels Instructions For Use (Инструкция по применению панелей ClearLLab 10C), Кат. № C00197 • ClearLLab Compensation Beads Instructions For Use (Инструкция по применению компенсационных частиц ClearLLab Compensation Beads), Кат. № C00201 • ClearLLab Compensation Kit Instructions For Use (Инструкция по применению компенсационного набора ClearLLab), Кат. № B74074 • ClearLLab Control Cells Instructions For use (Инструкция по применению контрольных клеток ClearLLab Control Cells), Кат. № B99884 • ClearLLab Control Cells QC Analysis Protocols Download Addendum (Дополнение по загрузке протоколов анализа контроля качества контрольных клеток ClearLLab), Кат. № C33270AA СОПРОВОДИТЕЛЬНЫЕ ДОКУМЕНТЫ • ClearLLab 10C Application System Guide (Руководство по системе приложения ClearLLab 10C), Кат. № C28528AA • Kaluza C Flow Cytometry Software Instructions For Use (Инструкции по использованию программного обеспечения для проточной цитометрии Kaluza C), Кат. № C20170 • Navios Flow Cytometer Instructions For Use (Инструкция по использованию проточного цитометра Navios), Кат. № 774517AH • Navios EX Flow Cytometer Instructions For Use (Инструкция по использованию проточного цитометра Navios EX), Кат. № B77121AD

Каждое событие имеет значение

6

Beckman Coulter • Панели ClearLLab 10C • C33362 AB

СЛУЧАИ

К этим случаям применяется

Лимфоциты (Селектор Ly)/ NK-клетки: красный CD19+ B-клетки: оранжевый CD3+ T-клетки: цвет морской волны

Моноциты (Селектор Mo): зеленый Гранулоциты (Селектор Gr): синий

CD45dim: фиолетовый Дополнительные аномальные популяции: сине-зеленый CD45-отрицательная популяция: серый

следующая селекция по приоритету цвета:

ОТСУТСТВИЕ ИММУНОФЕНОТИПИЧЕСКОЙ АНОМАЛИИ Проточная цитометрия является способом описания популяций лейкоцитов. Она может помочь при дифференциальной диагностике у пациентов с гематологическими нарушениями, у которых присутствуют или предполагаются гематопоэтическая неоплазия, в т. ч. хроническая лейкемия, острая лейкемия, неходжкинская лимфома, миелома, миелодиспластический синдром (МДС) и/или миелопролиферативные неоплазмы (МПН). Критически важным для идентификации аномальных популяций в этих клинических ситуациях является понимание нормальных клеточных популяций, присутствующих в образцах цельной крови, костного мозга и ткани лимфатического узла. Ниже приводятся примеры нормальных проб, окрашенных с использованием панелей ClearLLab 10C.

ПЕРИФЕРИЧЕСКАЯ ЦЕЛЬНАЯ КРОВЬ Случай №1: Нормальная цельная кровь

Клиническое описание При обследовании у этого пациента 65 лет, мужского пола, выявлена тромбоцитопения. Проба периферической цельной крови представлена на иммунофенотипирование методом проточной цитометрии с использованием панелей ClearLLab 10C. Иммунофенотипирование методом проточной цитометрии Пробирка с B-клетками

Рисунок 1: Эта точечная диаграмма зависимости Time (Время) и CD45 не имеет селекторов и показывает все события, собранные последовательно. Этот график предназначен для оценкипомехвпроточнойсистемевовремясбораданныхпробы.Стабильныйсборданных представленоднороднымраспределениемсобытийотносительновремени.События,которые отклоняются от стабильного рисунка, можно исключить в селекторе Time (Время).

Рисунок 2. Эта точечная диаграмма зависимости FS INT (Интегральное прямое рассеяние) от FS PEAK (Пиковое прямое рассеяние) показывает события в селекторе Time (Время). Этот график предназначен для исключения дублетов клеток или агрегатов. События-синглеты демонстрируют линейную связь для INT (Интегральное) против PEAK (Пиковое) и включены в селектор Singlets (Синглеты), тогда как дублеты находятся вне линейной взаимосвязи.

Содержание > Отсутствие иммунофенотипической аномалии > Случай №1: Нормальная цельная кровь

Каждое событие имеет значение

7

Beckman Coulter • Панели ClearLLab 10C • C33362 AB

Пробирка с B-клетками

Рисунок 3. Эта точечная диаграмма зависимости Side Scatter (Боковое рассеяние) от Forward Scatter (Прямое рассеяние) показывает события в селекторе Singlets (Синглеты). Этот график предназначен для исключения клеточного мусора, который обычно имеет уменьшенное прямоерассеяние.Ранниеапоптотическиеклеткитакжеимеютслегкаувеличенноебоковое рассеяние,втовремякакпоздниеапоптотическиеинекротическиеклеткиимеютизменчиво сниженное боковое рассеяние. Жизнеспособные клетки входят в селектор Cells (Клетки).

Рисунок 4. Эта точечная диаграмма зависимости CD45 от Side Scatter (Боковое рассеяние) показывает события в селекторе Cells (Клетки). Этот график предназначен для выделения разныхподмножествлейкоцитов,которыеопределеныселекторомкакCD45-положительные. CD45-отрицательнаяпопуляцияобычновключаетвсебяэритроциты,агрегатытромбоцитов, тканевый мусор или негематопоэтические клетки.

Рисунок 5. Эта точечная диаграмма зависимости CD45 от Side Scatter (Боковое рассеяние) показываетсобытиявселектореCD45+.Этаточечнаядиаграммапозволяетразличитьнесколько популяций лейкоцитов, обычно обнаруживаемых в периферической крови, костном мозге и образцах лимфатических узлов, включая лимфоциты (селектор Ly (Лимфоциты), красный/ оранжевый), моноциты (селектор Mo (Моноциты), зеленый) и гранулоциты (селектор Gr (Гранулоциты), синий). Селектор CD45dim (слабый CD45) (фиолетовый) обхватывает область, обычно занимаемую ранними предшественниками, то есть миелобластами и незрелыми B-клетками. Базофилы, плазмацитоидные дендритные клетки, плазмоциты и NK-клетки также могутпоявлятьсявэтойобласти.Путемпримененияразныхцветовксобытиям,представленным каждым селектором, можно идентифицировать разные популяции путем анализа.

Рисунок 6. Эта точечная диаграмма зависимости CD19 от Side Scatter (Боковое рассеяние) показывает события в селекторе Cells (Клетки). Селектор CD19+ идентифицирует CD19- положительные клетки. CD19 экспрессируется на зрелых и незрелых B-клетках, а также на большинствеплазмоцитов.Этиклеткиобычноимеютнизкоеилиумеренноебоковоерассеяние.

Содержание > Отсутствие иммунофенотипической аномалии > Случай №1: Нормальная цельная кровь

Каждое событие имеет значение

8

Beckman Coulter • Панели ClearLLab 10C • C33362 AB

Пробирка с B-клетками

Рисунок 7. Эта точечная диаграмма зависимости Kappa (Каппа) от Side Scatter (Боковое рассеяние) показывает все жизнеспособные клетки. Поверхностная легкая цепь каппа экспрессируется на зрелых B-клетках (оранжевый) и незрелых B-клетках последней стадии. Доля каппа-положительных B-клеток обычно больше, чем доля каппа-отрицательных (лямбда-положительных) B-клеток. Кажущаяся каппа-положительность наблюдается на моноцитах(зеленый)вследствиеопосредуемогоFcрецепторомсвязыванияиммуноглобулина. Положительные на легкую цепь каппа клетки отображаются на правой стороне графика.

Рисунок 8. Эта точечная диаграмма зависимости Lambda (Лямбда) от Side Scatter (Боковое рассеяние) показывает все жизнеспособные клетки. Поверхностная легкая цепь лямбда экспрессируется на зрелых B-клетках (оранжевый) и незрелых B-клетках последней стадии. Доля лямбда-положительных B-клеток обычно меньше, чем доля лямбда-отрицательных (каппа-положительных) B-клеток. Кажущаяся лямбда-положительность наблюдается на моноцитах(зеленый)вследствиеопосредуемогоFcрецепторомсвязыванияиммуноглобулина. Положительные на легкую цепь лямбда клетки отображаются на правой стороне графика.

Рисунок 9. Эта точечная диаграмма зависимости CD10 от Side Scatter (Боковое рассеяние) показываетвсежизнеспособныеклетки.CD10экспрессируетсянанезрелыхB-клетках,зрелых B-клеткахзародышевогоцентраизрелыхгранулоцитах (синий).Гранулоцитыимеютвысокое боковоерассеяние,вотличиеотлимфоидныхклеток,которыеимеютнизкоебоковоерассеяние.

Рисунок 10. Эта точечная диаграмма зависимости CD5 от Side Scatter (Боковое рассеяние) показываетвсежизнеспособныеклетки.CD5экспрессируетсянанезрелыхизрелыхT-клетках (красный, внизу справа), а также слабо на подмножестве зрелых B-клеток (оранжевый). Эти лимфоидные клетки обычно имеют низкое боковое рассеяние.

Содержание > Отсутствие иммунофенотипической аномалии > Случай №1: Нормальная цельная кровь

Каждое событие имеет значение

9

Beckman Coulter • Панели ClearLLab 10C • C33362 AB

Пробирка с B-клетками

Рисунок 11. Эта точечная диаграмма зависимости CD200 от Side Scatter (Боковое рассеяние) показывает все жизнеспособные клетки. CD200 обычно экспрессируется на B-клетках, но отрицателен в некоторых неопластических B-клетках. Это особенно полезно при отличении лимфомыизклетокмантии (обычноCD200-отрицательная)отхроническоголимфоцитарного лейкоза/малой лимфоцитарной лимфомы (обычно CD200-положительная).

Рисунок 12. Эта точечная диаграмма зависимости CD34 от Side Scatter (Боковое рассеяние) показывает все жизнеспособные клетки. CD34 — маркер ранних гематопоэтических предшественников. Он экспрессируется на гематопоэтических стволовых клетках, ранних миелоидных предшественниках (миелобластах) и незрелых B- и T-клетках (лимфобластах). Зрелые гранулоциты, моноциты и лимфоциты отрицательны на CD34. CD34-положительные предшественникиобычнопредставляютменее0,01%отвсехлейкоцитоввпериферической крови.

Рисунок 13. Эта точечная диаграмма зависимости CD38 от Side Scatter (Боковое рассеяние) показывает все жизнеспособные клетки. CD38 — маркер активации. Он экспрессируется на наивысшем уровне на плазмоцитах, на умеренном уровне на незрелых миелоидных и лимфоидныхпредшественниках,нанизкомуровненамоноцитах (зеленый)инаизменчивом уровне на активированных зрелых лимфоцитах.

Рисунок 14. Эта точечная диаграмма зависимости CD20 от Side Scatter (Боковое рассеяние) показываетвсежизнеспособныеклетки.CD20экспрессируетсяназрелыхB-клетках(оранжевый) инаразномнизкомуровненаподмножествезрелыхT-клеток.Онизменчивоэкспрессируется на незрелых B-клетках последней стадии. CD20-положительные клетки обычно находятся в селекторе лимфоцитов с низким боковым рассеянием.

Содержание > Отсутствие иммунофенотипической аномалии > Случай №1: Нормальная цельная кровь

Каждое событие имеет значение

10

Beckman Coulter • Панели ClearLLab 10C • C33362 AB

Пробирка с B-клетками

Рисунок15.ЭтаточечнаядиаграммазависимостиLambda(Лямбда)отKappa(Каппа)показывает всеклеткиCD19+.РанниенезрелыеB-клетки (фиолетовый)неэкспрессируютповерхностные легкие цепи иммуноглобулина, то есть, являются отрицательными как на легкую цепь каппа, такиналегкуюцепьлямбда.ЗрелыеB-клеткиявляютсяполиклональными,экспрессирующими либо легкую цепь каппа, либо легкую цепь лямбда. Нормальное соотношение цепей каппа к цепям лямбда составляет 1,4 в диапазоне от 1 до 2. Распространен повышенный фон вследствие прилипающего плазменного иммуноглобулина.

Рисунок 16. Эта точечная диаграмма зависимости CD19 от CD20 показывает все клетки в селекторе лимфоцитов Lymphocyte (Лимфоциты). Зрелые B-клетки экспрессируют и CD19, и CD20 (оранжевый). Некоторые неопластические B-клетки могут демонстрировать снижение экспрессии CD19 или CD20.

Рисунок 17. Эта точечная диаграмма зависимости CD19 от CD10 показывает все клетки в селекторе лимфоцитов Lymphocyte (Лимфоциты). B-клетки являются CD19-положительными (оранжевый).CD10-положительныезрелыеB-клеткираспределяютсявзародышевыхцентрахв лимфатическихузлах,ималоеподмножествонезрелыхB-клетокпоследнейстадииприсутствует в периферической крови и аспиратах костного мозга.

Рисунок 18. Эта точечная диаграмма зависимости CD38 от CD10 показывает все клетки в селекторелимфоцитовLymphocyte (Лимфоциты).CD38экспрессируетсянанаивысшемуровне наплазмоцитах,наумеренномуровненанезрелыхB-клеткахинанизкомуровненаB-клетках зародышевого центра. Большинство зрелых B-клеток (оранжевый) показывают низкую или нулевую экспрессиюCD38. T-клетки (красный) демонстрируют изменчивую экспрессиюCD38 в зависимости от состояния активации.

Содержание > Отсутствие иммунофенотипической аномалии > Случай №1: Нормальная цельная кровь

Каждое событие имеет значение

11

Beckman Coulter • Панели ClearLLab 10C • C33362 AB

Пробирка с B-клетками

Рисунок 19. Эта точечная диаграмма зависимости CD20 от CD10 показывает все клетки в селекторе лимфоцитов Lymphocyte (Лимфоциты). Большинство зрелых B-клеток однородно экспрессируют высокий уровень CD20 без CD10.

Рисунок20.ЭтаточечнаядиаграммазависимостиCD19отCD5показываетвсеклеткивселекторе лимфоцитов Lymphocyte (Лимфоциты). CD5 экспрессируется на T-клетках (красный, вверху слева), изменчиво экспрессируется на низком уровне на подмножестве нормальных зрелых B-клеток (оранжевый) и экспрессируется на некоторых подтипах неопластических B-клеток.

Рисунок 21. Эта точечная диаграмма зависимости CD20 от CD200 показывает все клетки в селекторелимфоцитовLymphocyte (Лимфоциты).БольшинствозрелыхB-клеток (оранжевый) экспрессируют CD200 на низком или умеренном уровне.

Рисунок 22. Эта точечная диаграмма зависимости CD5 от CD200 показывает все клетки в селекторе лимфоцитов Lymphocyte (Лимфоциты). Большинство зрелых B-клеток обычно экспрессируетCD200сподмножествомизменчивоэкспрессирующимCD5.Неопластические B-клеткиприхроническомлимфоцитарномлейкозе/малойлимфоцитарнойлимфомеобычно экспрессируютCD5иCD200,втовремякаклимфомаизклетокмантииобычноэкспрессирует CD5, но не CD200.

Содержание > Отсутствие иммунофенотипической аномалии > Случай №1: Нормальная цельная кровь

Каждое событие имеет значение

12

Beckman Coulter • Панели ClearLLab 10C • C33362 AB

Пробирка с T-клетками

Рисунок 1: Эта точечная диаграмма зависимости Time (Время) и CD45 не имеет селекторов и показывает все события, собранные последовательно. Этот график предназначен для оценкипомехвпроточнойсистемевовремясбораданныхпробы.Стабильныйсборданных представленоднороднымраспределениемсобытийотносительновремени.События,которые отклоняются от стабильного рисунка, можно исключить в селекторе Time (Время).

Рисунок 2. Эта точечная диаграмма зависимости FS INT (Интегральное прямое рассеяние) от FS PEAK (Пиковое прямое рассеяние) показывает события в селекторе Time (Время). Этот график предназначен для исключения дублетов клеток или агрегатов. События-синглеты демонстрируют линейную связь для INT (Интегральное) против PEAK (Пиковое) и включены в селектор Singlets (Синглеты), тогда как дублеты находятся вне линейной взаимосвязи.

Рисунок 3. Эта точечная диаграмма зависимости Side Scatter (Боковое рассеяние) от Forward Scatter (Прямое рассеяние) показывает события в селекторе Singlets (Синглеты). Этот график предназначен для исключения клеточного мусора, который обычно имеет уменьшенное прямое рассеяние с увеличенным боковым рассеянием. Ранние апоптотические клетки такжеимеютслегкаувеличенноебоковоерассеяние,втовремякакпоздниеапоптотические и некротические клетки имеют изменчиво сниженное боковое рассеяние. Жизнеспособные клетки входят в селектор Cells (Клетки).

Рисунок 4. Эта точечная диаграмма зависимости CD45 от Side Scatter (Боковое рассеяние) показываетсобытиявселектореCells(Клетки).Этотграфикпредназначендлявыделенияразных типовлейкоцитов,которыеявляютсяCD45-положительными.CD45-отрицательнаяпопуляция обычновключаетвсебяэритроциты,агрегатытромбоцитовилинегематопоэтическиеклетки.

Содержание > Отсутствие иммунофенотипической аномалии > Случай №1: Нормальная цельная кровь

Каждое событие имеет значение

13

Beckman Coulter • Панели ClearLLab 10C • C33362 AB

Пробирка с T-клетками

Рисунок 5. Эта точечная диаграмма зависимости CD45 от Side Scatter (Боковое рассеяние) показываетсобытиявселектореCD45+.Этаточечнаядиаграммапозволяетразличитьнесколько популяций лейкоцитов, обычно обнаруживаемых в периферической крови, костном мозге и образцахлимфатическихузлов,включаялимфоциты (селекторLy (Лимфоциты),красный/цвет морской волны), моноциты (селектор Mo (Моноциты), зеленый) и гранулоциты (селектор Gr (Гранулоциты), синий). Селектор CD45dim (слабый CD45) (фиолетовый) обхватывает область, обычно занимаемую миелобластами и незрелыми B-клетками. Базофилы, плазмацитоидные дендритные клетки, плазмоциты и NK-клетки также могут находиться в этой области. Путем применения разных цветов к событиям, представленным каждым селектором, можно прослеживать разные популяции путем анализа.

Рисунок 6. Эта точечная диаграмма зависимости CD3 от Side Scatter (Боковое рассеяние) показываетвсежизнеспособныеклетки.СелекторCD3+идентифицируетклеткисэкспрессией поверхностногоCD3(цветморскойволны).CD3высокоспецифичендляT-клеток,экспрессируясь только на поверхности зрелых T-клеток и незрелых T-клеток последней стадии. Эти клетки обычно имеют низкое или умеренное боковое рассеяние.

Рисунок 8. Эта точечная диаграмма зависимости CD4 от Side Scatter (Боковое рассеяние) показывает все жизнеспособные клетки. CD4 экспрессируется на подмножестве незрелых и зрелых T-клеток на высоком уровне (цвет морской волны). CD4 также экспрессируется на моноцитах (зеленый) на уровне, более низком, чем уровень CD4-положительных T-клеток.

Рисунок 7. Эта точечная диаграмма зависимости TCRγδ от Side Scatter (Боковое рассеяние) показываетвсежизнеспособныеклетки.TCRγδявляетсясубъединицейT-клеточногорецептора иэкспрессируетсянанебольшомподмножествецитотоксическихT-клеток.Этиклеткиобычно имеют низкое боковое рассеяние (цвет морской волны).

Содержание > Отсутствие иммунофенотипической аномалии > Случай №1: Нормальная цельная кровь

Каждое событие имеет значение

14

Beckman Coulter • Панели ClearLLab 10C • C33362 AB

Пробирка с T-клетками

Рисунок 10. Эта точечная диаграмма зависимости CD56 от Side Scatter (Боковое рассеяние) показывает все жизнеспособные клетки. CD56 обычно экспрессируется на большом подмножествеNK-клеток(красный),T-клеткахсактивностьюестественныхкиллеров(NK/T-клетки) имногихгамма/дельтаT-клетках (цветморскойволны).CD56такжечастичноэкспрессируется на моноцитах (зеленый) в реактивных и неопластических условиях.

Рисунок 9. Эта точечная диаграмма зависимости CD2 от Side Scatter (Боковое рассеяние) показываетвсежизнеспособныеклетки.CD2представляетсобойантиген,экспрессируемый практически всеми незрелыми и зрелыми T-клетками (цвет морской волны). CD2 также экспрессируется на NK-клетках (красный, снизу справа) и на низком уровне на моноцитах (зеленый).

Рисунок 12. Эта точечная диаграмма зависимости CD34 от Side Scatter (Боковое рассеяние) показывает все жизнеспособные клетки. CD34 — маркер ранних гематопоэтических предшественников. Он экспрессируется на гематопоэтических стволовых клетках, ранних миелоидных предшественниках (миелобластах) и незрелых B- и T-клетках (лимфобластах). Зрелые гранулоциты, моноциты и лимфоциты отрицательны на CD34. CD34-положительные предшественникиобычнопредставляютменее0,01%отвсехлейкоцитоввпериферической крови.

Рисунок 11. Эта точечная диаграмма зависимости CD5 от Side Scatter (Боковое рассеяние) показывает все жизнеспособные клетки. CD5 экспрессируется на большинстве незрелых и зрелых T-клеток (цвет морской волны) и низком уровне на подмножестве зрелых B-клеток. Очень ранние незрелые T-клетки и гамма/дельта T-клетки обычно экспрессируют CD5 на нулевомилиоченьнизкомуровне.НебольшоеподмножествоNK-клетокэкспрессируетCD5.

Содержание > Отсутствие иммунофенотипической аномалии > Случай №1: Нормальная цельная кровь

Каждое событие имеет значение

15

Beckman Coulter • Панели ClearLLab 10C • C33362 AB

Пробирка с T-клетками

Рисунок 13. Эта точечная диаграмма зависимости CD7 от Side Scatter (Боковое рассеяние) показывает все жизнеспособные клетки. CD7 экспрессируется на незрелых T-клетках на раннейстадииразвитияT-клетокисохраняетсявходесозреванияT-клеток,чтобыизменчиво экспрессироваться на зрелых T-клетках (цвет морской волны). Он также равномерно экспрессируетсянаNK-клетках(красный,снизусправа)ислабоэкспрессируетсянаподмножестве плазмацитоидных дендритных клеток и подмножестве линии коммитированных CD34- положительных предшественников.

Рисунок 14. Эта точечная диаграмма зависимости CD8 от Side Scatter (Боковое рассеяние) показывает все жизнеспособные клетки. CD8 экспрессируется на подмножестве незрелых и зрелыхT-клеток(цветморскойволны)иопределяетпопуляциюцитотоксическихзрелыхT-клеток. Он изменчиво экспрессируется на низком уровне на NK-клетках и гамма-дельта T-клетках.

Рисунок 15. Эта точечная диаграмма зависимости CD3 от CD56 показывает все клетки в селекторе лимфоцитов Lymphocyte (Лимфоциты). T-клетки определяются по экспрессии CD3, таккаконприсутствуетнавсехзрелыхT-клеткахинеэкспрессируетсяклеткамидругихлиний. NK-клеткипоопределениюнеэкспрессируютповерхностныйCD3,ноэкспрессируютCD56на большом подмножестве (красный, вверху слева). Небольшие подмножества зрелых T-клеток такжеэкспрессируютCD56,вчастности,T-клеткисактивностьюестественныхкиллеров (NK/T- клетки) и гамма-дельта T-клетки.

Рисунок16.ЭтаточечнаядиаграммазависимостиCD5отCD3показываетвсеклеткивселекторе лимфоцитовLymphocyte (Лимфоциты).CD3иCD5совместноэкспрессируютсянабольшинстве зрелыхT-клеток(цветморскойволны),хотянебольшоеподмножествоцитотоксическихT-клеток, имеющееморфологиюгранулярныхлимфоцитов,частопоказываетсниженнуюилинулевую экспрессию CD5. CD5 не экспрессируется на большинстве NK-клеток.

Содержание > Отсутствие иммунофенотипической аномалии > Случай №1: Нормальная цельная кровь

Каждое событие имеет значение

16

Beckman Coulter • Панели ClearLLab 10C • C33362 AB

Пробирка с T-клетками

Рисунок 18. Эта точечная диаграмма зависимости CD8 от CD4 показывает все клетки в селекторелимфоцитовLymphocyte (Лимфоциты).CD3-положительныеT-клетки (цветморской волны) содержат CD4-положительное (хелперное) и CD8-положительное (цитотоксическое) подмножества.CD4-положительныеT-клеткиобычнопревосходятпочислуCD8-положительные T-клетки с соотношением CD4:CD8 от 1:1 до 4:1 в периферической крови. Также присутствуют случайныеCD4иCD8двойныеотрицательныеилидвойныеположительныеT-клетки.Двойные отрицательныеT-клеткиобычносостоятпреимущественноизгамма/дельтаT-клеток.Следует отметить, CD4-положительные, но CD3-отрицательные клетки (красный, по центру слева) являютсямоноцитами,попавшимивселекторлимфоцитов.Этодемонстрирует,чтоселекция CD45 относительно Side scatter (Боковое рассеяние) сама по себе не позволяет выполнить чистую идентификацию лимфоцитов.

Рисунок 17. Эта точечная диаграмма зависимости CD7 от CD2 показывает все клетки в селекторе лимфоцитов Lymphocyte (Лимфоциты). CD2 и CD7 совместно экспрессируются на преобладающем большинстве зрелых T-клеток (цвет морской волны) и NK-клеток (красный, вверху справа).

Рисунок19.ЭтаточечнаядиаграммазависимостиCD3отCD4показываетвсеклеткивселекторе лимфоцитовLymphocyte (Лимфоциты).ВсеCD4-положительныеT-клеткиэкспрессируютCD3. МоноцитыиплазмацитоидныедендритныеклеткиэкспрессируютCD4наболеенизкомуровне, чем CD4-положительные T-клетки, и не экспрессируют CD3. NK-клетки не экспрессируют как CD3, так и CD4.

Рисунок20.ЭтаточечнаядиаграммазависимостиCD3отCD8показываетвсеклеткивселекторе лимфоцитов Lymphocyte (Лимфоциты). Все CD8-положительные T-клетки экспрессируют CD3 (цвет морской волны). Небольшое подмножество NK-клеток также экспрессирует CD8 (красный, вверху слева) без CD3.

Содержание > Отсутствие иммунофенотипической аномалии > Случай №1: Нормальная цельная кровь

Каждое событие имеет значение

17

Beckman Coulter • Панели ClearLLab 10C • C33362 AB

Пробирка с T-клетками

Рисунок 21. Эта точечная диаграмма зависимости CD3 от TCRγδ показывает все клетки в селекторе лимфоцитов Lymphocyte (Лимфоциты). Небольшое подмножество T-клеток экспрессируетTCRгамма/дельта,которыйэкспрессируетсясовместносCD3.Ввысокойстепени линейная связь между CD3 и TCR связана с их присутствием в качестве гетеродимерного комплекса с фиксированным соотношением 1:1, поэтому увеличенная экспрессия одного из них демонстрирует увеличенную экспрессию другого.

Содержание > Отсутствие иммунофенотипической аномалии > Случай №1: Нормальная цельная кровь

Каждое событие имеет значение

18

Beckman Coulter • Панели ClearLLab 10C • C33362 AB

Пробирка с M1-клетками

Рисунок 1: Эта точечная диаграмма зависимости Time (Время) и CD45 не имеет селекторов и показывает все события, собранные последовательно. Этот график предназначен для оценкипомехвпроточнойсистемевовремясбораданныхпробы.Стабильныйсборданных представленоднороднымраспределениемсобытийотносительновремени.События,которые отклоняются от стабильного рисунка, можно исключить в селекторе Time (Время).

Рисунок 2. Эта точечная диаграмма зависимости FS INT (Интегральное прямое рассеяние) от FS PEAK (Пиковое прямое рассеяние) показывает события в селекторе Time (Время). Этот график предназначен для исключения дублетов клеток или агрегатов. События-синглеты демонстрируют линейную связь для INT (Интегральное) против PEAK (Пиковое) и включены в селектор Singlets (Синглеты), тогда как дублеты находятся вне линейной взаимосвязи.

Рисунок 3. Эта точечная диаграмма зависимости Side Scatter (Боковое рассеяние) от Forward Scatter (Прямое рассеяние) показывает события в селекторе Singlets (Синглеты). Этот график предназначен для исключения клеточного мусора, который обычно имеет уменьшенное прямое рассеяние с увеличенным боковым рассеянием. Ранние апоптотические клетки такжеимеютслегкаувеличенноебоковоерассеяние,втовремякакпоздниеапоптотические и некротические клетки имеют изменчиво сниженное боковое рассеяние. Жизнеспособные клетки входят в селектор Cells (Клетки).

Рисунок 4. Эта точечная диаграмма зависимости CD45 от Side Scatter (Боковое рассеяние) показывает события в селекторе Cells (Клетки). Этот график предназначен для выделения разныхподмножествлейкоцитов,которыеопределеныселекторомкакCD45-положительные. CD45-отрицательнаяпопуляцияобычновключаетвсебяэритроциты,агрегатытромбоцитов, тканевый мусор или негематопоэтические клетки.

Содержание > Отсутствие иммунофенотипической аномалии > Случай №1: Нормальная цельная кровь

Каждое событие имеет значение

19

Beckman Coulter • Панели ClearLLab 10C • C33362 AB

Пробирка с M1-клетками

Рисунок 5. Эта точечная диаграмма зависимости CD45 от Side Scatter (Боковое рассеяние) показываетсобытиявселектореCD45+.Этаточечнаядиаграммапозволяетразличитьнесколько популяций лейкоцитов, обычно обнаруживаемых в периферической крови, костном мозге и образцах лимфатических узлов, включая лимфоциты (селектор Ly (Лимфоциты), красный), моноциты(селекторMo(Моноциты),зеленый)игранулоциты(селекторGr(Гранулоциты),синий). Селектор CD45dim (слабый CD45) (фиолетовый) обхватывает область, обычно занимаемую миелобластами и незрелыми B-клетками. Базофилы, плазмацитоидные дендритные клетки, плазмоциты и NK-клетки также могут находиться в этой области. Путем применения разных цветов к событиям, представленным каждым селектором, можно прослеживать разные популяции путем анализа.

Рисунок 6. Эта точечная диаграмма зависимости CD16 от Side Scatter (Боковое рассеяние) показываетвсежизнеспособныеклетки.CD16экспрессируетсянасвоемнаибольшемуровне назрелыхгранулоцитах (синий).БольшинствоNK-клетокэкспрессируетCD16 (красный,внизу справа), как и подмножество активированных моноцитов (зеленый).

Рисунок 8. Эта точечная диаграмма зависимости CD10 от Side Scatter (Боковое рассеяние) показываетвсежизнеспособныеклетки.CD10экспрессируетсянанезрелыхB-клетках,зрелых B-клеткахзародышевогоцентраизрелыхгранулоцитах (синий).Гранулоцитыимеютвысокое боковоерассеяние,вотличиеотлимфоидныхклеток,которыеимеютнизкоебоковоерассеяние.

Рисунок 7. Эта точечная диаграмма зависимости CD7 от Side Scatter (Боковое рассеяние) показывает все жизнеспособные клетки. CD7 экспрессируется на незрелых T-клетках на раннейстадииразвитияT-клетокисохраняетсявходесозреванияT-клеток,чтобыизменчиво экспрессироватьсяназрелыхT-клетках (красный,внизусправа).Онтакжеэкспрессируетсяна NK-клетках и слабо экспрессируется на подмножестве плазмацитоидных дендритных клеток и подмножестве линии коммитированных предшественников.

Содержание > Отсутствие иммунофенотипической аномалии > Случай №1: Нормальная цельная кровь

Каждое событие имеет значение

20

Beckman Coulter • Панели ClearLLab 10C • C33362 AB

Пробирка с M1-клетками

Рисунок 9. Эта точечная диаграмма зависимости CD13 от Side Scatter (Боковое рассеяние) показываетвсежизнеспособныеклетки.CD13экспрессируетсянасозревающихгранулоцитах (синий), зрелых моноцитах (зеленый) и на миелоидных предшественниках (фиолетовый).

Рисунок 10. Эта точечная диаграмма зависимости CD64 от Side Scatter (Боковое рассеяние) показываетвсежизнеспособныеклетки.CD64экспрессируетсянасвоемнаибольшемуровне на зрелых моноцитах (зеленый). CD64 не очень хорошо экспрессируется на покоящихся зрелыхгранулоцитах (синий),ноегоэкспрессияувеличиваетсяприактивациигранулоцитов. CD64 не экспрессируется на лимфоцитах (красный) и на большинстве CD34-положительных предшественников.АктивированныезрелыемоноцитыэкспрессируютCD64наболеенизком уровне и имеют более низкое боковое рассеяние.

Рисунок 11. Эта точечная диаграмма зависимости CD34 от Side Scatter (Боковое рассеяние) показывает все жизнеспособные клетки. CD34 — маркер ранних гематопоэтических предшественников. Он экспрессируется на гематопоэтических стволовых клетках, ранних миелоидных предшественниках (миелобластах) и незрелых B- и T-клетках (лимфобластах). Зрелыегранулоциты,моноцитыилимфоцитыотрицательнынаCD34.CD34-положительные предшественникиобычнопредставляютменее0,01%отвсехлейкоцитоввпериферической крови.

Рисунок 12. Эта точечная диаграмма зависимости CD14 от Side Scatter (Боковое рассеяние) показываетвсежизнеспособныеклетки.CD14экспрессируетсянавысокомуровненазрелых моноцитах (зеленый) и на низком уровне на зрелых гранулоцитах (синий). Активированные зрелые моноциты экспрессируют CD14 на более низком уровне и имеют более низкое боковое рассеяние.

Содержание > Отсутствие иммунофенотипической аномалии > Случай №1: Нормальная цельная кровь

Каждое событие имеет значение

21

Beckman Coulter • Панели ClearLLab 10C • C33362 AB

Пробирка с M1-клетками

Рисунок13.ЭтаточечнаядиаграммазависимостиHLA-DRотSideScatter (Боковоерассеяние) показываетвсежизнеспособныеклетки.HLA-DRэкспрессируетсянаантиген-презентирующих клетках, включая моноциты (зеленый) и плазмацитоидные дендритные клетки. Он также экспрессируется на CD34-положительных предшественниках, незрелых и зрелых B-клетках и активированных T-клетках.

Рисунок 14. Эта точечная диаграмма зависимости CD11b от Side Scatter (Боковое рассеяние) показываетвсежизнеспособныеклетки.CD11bэкспрессируетсянагранулоцитах (синий)ина моноцитах (зеленый). CD11b также экспрессируется на NK-клетках и базофилах.

Рисунок15.ЭтаточечнаядиаграммазависимостиCD11bотCD16показываетвсежизнеспособные клетки. CD11b экспрессируется на моноцитах (зеленый), незрелых и зрелых гранулоцитах (синий) и NK-клетках (красный). CD16 экспрессируется на незрелых и зрелых гранулоцитах (синий) и на подмножестве NK-клеток (красный, вверху справа). Активированные зрелые моноцитыэкспрессируютCD16наизменчивомуровнеиявляютсяCD11b-положительными.

Рисунок16.ЭтаточечнаядиаграммазависимостиCD16отCD13показываетвсежизнеспособные клетки. CD13 экспрессируется на гранулоцитах (синий), моноцитах (зеленый), базофилах и CD34-положительныхпредшественниках.CD16экспрессируетсянасозревающихгранулоцитах (синий) и подмножестве NK-клеток (красный, внизу справа).

Содержание > Отсутствие иммунофенотипической аномалии > Случай №1: Нормальная цельная кровь

Каждое событие имеет значение

22

Beckman Coulter • Панели ClearLLab 10C • C33362 AB

Пробирка с M1-клетками

Рисунок17.ЭтаточечнаядиаграммазависимостиCD13отCD34показываетвсежизнеспособные клетки. CD13 экспрессируется на гранулоцитах (синий), моноцитах (зеленый), базофилах и CD34-положительныхпредшественниках.CD34экспрессируетсянараннихгематопоэтических предшественниках. Зрелые гранулоциты, моноциты и лимфоциты отрицательны на CD34.

Рисунок18.ЭтаточечнаядиаграммазависимостиCD14отCD64показываетвсежизнеспособные клетки. CD64 экспрессируется на высоком уровне на моноцитах (зеленый) и на более низком уровне на гранулоцитах (синий). CD14 экспрессируется на высоком уровне на моноцитах и на более низком уровне на гранулоцитах (синий). Активированные зрелые моноциты экспрессируют CD14 и CD64 на изменчиво более низком уровне.

Рисунок19.ЭтаточечнаядиаграммазависимостиCD14отCD16показываетвсежизнеспособные клетки. CD14 экспрессируется на высоком уровне на моноцитах (зеленый) и на более низком уровне на гранулоцитах (синий, вверху слева). CD16 экспрессируется на гранулоцитах и подмножестве NK-клеток (красный, слева по центру). Активированные зрелые моноциты экспрессируют CD14 и CD16 на изменчиво более низком уровне.

Рисунок 20. Эта точечная диаграмма зависимости HLA-DR от CD10 показывает все жизнеспособные клетки. HLA-DR экспрессируется на моноцитах (зеленый), B-клетках, плазмацитоидных дендритных клетках и CD34-положительных предшественниках. CD10 экспрессируется зрелыми гранулоцитами (синий).

Содержание > Отсутствие иммунофенотипической аномалии > Случай №1: Нормальная цельная кровь

Каждое событие имеет значение

23

Beckman Coulter • Панели ClearLLab 10C • C33362 AB

Пробирка с M1-клетками

Рисунок 21. Эта точечная диаграмма зависимости CD7 от CD13 показывает все жизнеспособные клетки. CD7 экспрессируется на T-клетках и NK-клетках (красный, внизу справа). CD13 экспрессируется на гранулоцитах (синий), моноцитах (зеленый), базофилах и CD34-положительных предшественниках. Совместная экспрессия CD13 и CD7 обычно не наблюдается.

Содержание > Отсутствие иммунофенотипической аномалии > Случай №1: Нормальная цельная кровь

Каждое событие имеет значение

24

Beckman Coulter • Панели ClearLLab 10C • C33362 AB

Пробирка с M2-клетками

Рисунок 1: Эта точечная диаграмма зависимости Time (Время) и CD45 не имеет селекторов и показывает все события, собранные последовательно. Этот график предназначен для оценкипомехвпроточнойсистемевовремясбораданныхпробы.Стабильныйсборданных представленоднороднымраспределениемсобытийотносительновремени.События,которые отклоняются от стабильного рисунка, можно исключить в селекторе Time (Время).

Рисунок 2. Эта точечная диаграмма зависимости FS INT (Интегральное прямое рассеяние) от FS PEAK (Пиковое прямое рассеяние) показывает события в селекторе Time (Время). Этот график предназначен для исключения дублетов клеток или агрегатов. События-синглеты демонстрируют линейную связь для INT (Интегральное) против PEAK (Пиковое) и включены в селектор Singlets (Синглеты), тогда как дублеты находятся вне линейной взаимосвязи.

Рисунок 3. Эта точечная диаграмма зависимости Side Scatter (Боковое рассеяние) от Forward Scatter (Прямое рассеяние) показывает события в селекторе Singlets (Синглеты). Этот график предназначен для исключения клеточного мусора, который обычно имеет уменьшенное прямоерассеяние.Ранниеапоптотическиеклеткитакжеимеютслегкаувеличенноебоковое рассеяние,втовремякакпоздниеапоптотическиеинекротическиеклеткиимеютизменчиво сниженное боковое рассеяние. Жизнеспособные клетки входят в селектор Cells (Клетки).

Рисунок 4. Эта точечная диаграмма зависимости CD45 от Side Scatter (Боковое рассеяние) показывает события в селекторе Cells (Клетки). Этот график предназначен для выделения разныхподмножествлейкоцитов,которыеопределеныселекторомкакCD45-положительные. CD45-отрицательнаяпопуляцияобычновключаетвсебяэритроциты,агрегатытромбоцитов, тканевый мусор или негематопоэтические клетки.

Содержание > Отсутствие иммунофенотипической аномалии > Случай №1: Нормальная цельная кровь

Каждое событие имеет значение

25

Beckman Coulter • Панели ClearLLab 10C • C33362 AB