OMB Meeting Book_9-11-14 - page 44

各位专家：
对于 AOAC 2011.10 Vitamin B12 in Infant Formula and Adult Nutritionals by HPLC，液相
分离阶段，第一步使用体积排阻色谱（size exclusion column）初步分离 VB12 然后使用反相
色谱（C18 column ）进一步分离，我们有如下意见：
AOAC 2011.10 原始连接图如下：
在图 A 的阶段，由于等度泵（isocratic pump）使用的体积排阻色谱（ size exclusion column）
在 1.1~1.2mL/min 流速下一般柱压比较小，而梯度泵（gradient pump ）为了进一步的降低干
扰和提高灵敏度，使用的反相色谱（C18 column）是 3μ m 的快速柱，在 1mL/min 的流速下
柱压一般比体积排阻色谱（size exclusion column）高。
在图 B 的阶段，体积排阻色谱（size exclusion column）直接与反相色谱（C18 column）
串联，而流速是 1.1~1.2mL/min，这就相当于在体积排阻色谱（size exclusion column ）后面
瞬间加入一个高于自身压力的柱后压。
当 VB12 从体积排阻色谱（size exclusion column）上全部转移到反相色谱（C18 column）
之后，需要再次切换到图 A 的阶段，这时候又相当于体积排阻色谱（size exclusion column）
后面瞬间降低一个高于自身压力的柱后压。
所以在每次分析的 30min 里，体积排阻色谱（size exclusion column）都要经过一个柱后
压力骤升和骤降的过程，长此以往，体积排阻色谱（size exclusion column）的寿命会有很大
的损伤。
而且在这个阶段体积排阻色谱（size exclusion column）本身柱压骤升，所以 VB12 的保
留行为与体积排阻色谱（size exclusion column）本身的保留时间已经不完全相符，同时，因
为在图 B 的阶段因为反相色谱（C18 column）后面没有连接检测器，所以对于确定 VB12
的保留时间需要进行估算，长时间做样品的时候，因为排阻色谱（size exclusion column）的
压力骤升骤降会导致 VB12 峰在一定周期内会有很大的漂移，然后需要经常更改阀切换时间
或者通过修改流速来确定 VB12 在阀切换周期内从排阻色谱（size exclusion column）上冲洗
下来，增加了液相色谱操作人员的专业要求及增加了工作量。
通过我们实验室的实验推敲过程，推荐如下设置：